关键词： 伪狂犬病毒   基因工程抗体   毕赤酵母表达   酵母编辑   中和活性  

摘要： 伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染引起的一种烈性传染病,猪被认为是PRV的主要宿主和传染源,在自然条件下犬、貂、狼、猫、牛、羊、兔等许多动物对该病毒也容易感染。自2011年以来,在我国山东、河北、辽宁和北京等地陆续有关犬、水貂等毛皮动物感染PRV的报道。毛皮动物感染PRV的主要特征为瘙痒、发热、呼吸系统和神经系统障碍。目前,尚无专门针对毛皮动物PRV的疫苗,也无治疗药物。毕赤酵母是一种甲基营养酵母,其优点之一是与哺乳动物系统如CHO细胞系具有高度的相似性。这种酵母系统不仅价格低廉,而且具有相对快速的表达时间、协同翻译和翻译后处理。通过使用工业生物反应器,可以从小的培养量中大规模地生产感兴趣的蛋白质。在实验室制备的具有中和活性的鼠源单克隆抗体基础之上,进行单链抗体sc Fv-Fc在缺失YPS1基因的GS115-ΔYPS1毕赤酵母表达。为了构建融合表达的单链抗体sc Fv-Fc,首先对抗伪狂犬病毒单克隆抗体轻、重链可变区进行测序,然后与狐源Ig G天然抗体的Fc片段进行基因融合。将编码sc Fv-Fc抗体的融合基因克隆到p PIC9质粒整合到酵母基因组中,通过间接免疫荧光法筛选到了有活性的阳性整合菌株,sc Fv-Fc在毕赤酵母中的表达量达到39.2 mg/L。实验结果显示YPS1蛋白敲除后对外源表达蛋白的降解现象具有一定的改善,提高了外源蛋白的表达量的同时不影响菌体生长及正常的外源蛋白诱导表达;间接免疫荧光实验表明在毕赤酵母中产生的sc Fv-Fc抗体是具有与PRV结合的生物学特性,病毒中和试验表明重组单链抗体具有活性,中和效价为1:10。从实验结果来看此抗体具有诊断和治疗伪狂犬病毒病价值及潜力,同时也表明毕赤酵母在生产蛋白药物领域具有巨大的研发潜力。

关键词： 鸭甲型肝炎病毒   鉴定   间接酶联免疫吸附试验   防治   基因工程疫苗   中药  

摘要： 鸭病毒性肝炎(duck viral hepatitis,DVH)是一种具有高度接触性和高致死率的传染病,主要病原为鸭甲型肝炎病毒(duck hepatitis A viral,DHAV)。其特点是肝空泡增多、肝坏死和出血。幼雏鸭感染后的病死率可达95%以上。鸭甲型肝炎病毒可分为DHAV-1、DHAV-2和DHAV-3共3种血清型,其中DHAV-1最广泛且毒性最强。为准确、高效、特异地鉴定DHAV,建立一系列检测方法。目前较为常用的是间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA)。对DHAV-1的防治早期多使用灭活苗和弱毒苗,但是并未达到理想的免疫效果。近年来,很多研究集中于基因工程疫苗及中药的应用,对于防治DHAV-1具有很好的前景。

关键词： 猪流行性腹泻病毒   基因工程疫苗   核酸疫苗  

摘要： 猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是一种急性肠道传染病,给世界各国带来严重的经济损失。猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起该病的主要病原体,感染该病毒可引起猪体内严重的肠黏膜破坏、肠细胞坏死,进而引起急性水泻。目前PEDV毒株在我国广泛流行,导致仔猪的感染率和死亡率急剧上升,严重影响我国养猪行业的健康发展。高致病性PEDV毒株的暴发引起了各国的高度关注,研究者目前已开发出各种类型的疫苗,极大的控制了病毒的传播速度和死亡率。在众多不同种类的疫苗中,基因工程疫苗以其良好的安全性和较高的免疫保护而备受关注,目前已开发出的基因工程疫苗包括亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗、重组活载体疫苗、转基因植物疫苗和核酸疫苗等。本文主要针对这5种基因工程疫苗的最新研究成果展开综述,为将来的疫苗研究和产业化提供理论指导。

关键词： 翻转课堂   建构主义   知识同化   生物技术  

摘要： 本研究选择了甘肃省天水师范学院生物科学专业的必修课程——微生物学中的“遗传育种”与“基因工程”两个章节开展了翻转课堂的设计和实施。翻转课堂选择复旦大学“改变生活的生物技术”数字课程作为内容支撑。该教学研究的对象为微生物学课程的两个平行班,一个班级实施翻转课堂教学,另一个班级采用传统的课堂教学模式。结果显示,以意义建构为基础的翻转课堂中,针对“遗传育种”和“基因工程”的新知识、新概念、新实践,学生获得了有意义的建构,成绩分布范围窄,4个月后再进行测试,学生成绩分布的主峰发生较少偏移。但是在传统课堂教学模式中,学生对知识的接收度个体差异大,成绩分布较宽泛,4个月后再进行测试,学生成绩分布上表现为主峰的偏移。该结果可说明,学生在利用数字资源学习的过程中,对新知识、新信息能够主动选择、加工和处理,是新信息的加工者,在自身已有的知识结构中,能建构出新的意义。

关键词： 疫苗   传统疫苗   基因工程疫苗   核酸疫苗   反向疫苗学   新型冠状病毒疫苗  

摘要： 疫苗是目前人类预防传染病最经济有效的制品。自18世纪天花疫苗诞生至今,疫苗研发经历了数百年的发展,其大体分为三个阶段:传统疫苗、基因工程疫苗和核酸疫苗。随着反向疫苗学等技术的发展,疫苗研发迎来新的广阔发展前景。该文简要介绍疫苗的发展历史、各类疫苗的特点、新型冠状病毒疫苗研发概况及疫苗的发展前景。

关键词： 狂犬病   狂犬病病毒   灭活疫苗   弱毒疫苗   核酸疫苗   亚单位疫苗   病毒样颗粒疫苗   口服疫苗   基因工程  

摘要： 狂犬病是由狂犬病病毒感染中枢神经系统引起的一种古老的人兽共患传染病,人和动物感染后一旦出现临床症状,死亡率几乎100%,至今仍无有效的治疗方法。当前,接种疫苗是预防狂犬病最为有效的途径。因此,狂犬病疫苗研发一直是狂犬病研究领域的热点之一,进而不断涌现出新型疫苗。本文对近期狂犬病新型灭活疫苗、弱毒疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗、口服疫苗等基因工程疫苗研究进展进行系统梳理,以期把握狂犬病疫苗研究现状,为研发更为有效的狂犬病新型疫苗提供新思路。

关键词： 鱼   基因工程疫苗   免疫   保护作用  

摘要： 鱼病的化学药物防治会导致水质恶化、水产品药物残留超标或病原体耐药性增强等弊端。随着鱼类免疫学研究以及分子生物学技术的发展,鱼用基因工程疫苗的研究受到了广泛关注。系统地解析与梳理了鱼用基因工程疫苗发展的背景、意义及疫苗类型和国内外的研究与应用现状,明确现阶段我国鱼用基因工程疫苗发展面临的挑战并提出相应的发展建议,旨在为未来鱼用疫苗的开发和应用提供参考。

关键词： 高光效育种   基因工程   C_(3)植物   Rubisco   C_(4)途径   油茶  

摘要： 光合作用是地球上最重要的生命活动之一,植物的90%生物学产量直接来自于光合作用产生的有机化合物。本文回顾了C_( 3)植物高光效基因工程育种研究工作,重点介绍了C_( 3)碳同化途径的特点和Rubisco的修饰与改造,以及利用C_( 4)途径关键酶基因提高C_( 3)植物光合效率方面的研究进展。油茶作为主要的木本油料作物之一,营养物质需求巨大,具有CO_( 2)饱和点较低、补偿点较高,光合效率不高的C_( 3)植物特性。综述C_( 3)植物高光效基因工程育种研究进展,可为油茶高光效基因工程育种提供参考。

关键词： K88ac-ST_(1)-LT_(B)   重组菌株   培养条件   灭活  

摘要： 试验使用发酵罐对大肠杆菌K88ac-ST_(1)-LT_(B)三价基因工程疫苗菌株进行培养,从培养基、通气量、诱导剂以及诱导条件4个方面进行研究,根据该工程疫苗菌株的特性进行灭活试验研究。结果表明,改良LB培养基为该菌株的最适培养基,诱导剂乳糖100 mmol/L、诱导6 h以上,可以达到经济效益的最大化;在20万mL发酵罐中培养K88ac-ST_(1)-LT_(B)重组菌株的最适宜通气量为500 L/min。灭活试验结果显示,在37℃条件下,加入0.4%甲醛溶液搅动、灭活48 h,灭活效果较为彻底。

关键词： 结构熵   科学突破   知识网络   主题识别   科学预测  

摘要： [目的/意义]科学突破主题是对领域发展起关键性作用的主题,对此类主题的发展规律进行探索有助于展开后续识别与预测工作,可更早地进行科学布局,优化科技决策。[方法/过程]文章以基因工程疫苗领域(GEV)为例开展实证研究。从科学突破主题会对知识网络状态带来影响这一基本点切入,以主题词共现网络表征知识网络,首先利用结构熵对知识网络的状态进行测度;之后挖掘对知识网络状态影响较大的主题,作为科学突破主题的候选项;最后借助专家和既有科学成果评估方法的识别效果。[结果/结论]以结构熵测度知识网络的整体性变化,适用于科学突破主题的识别,但其效果的稳定性以及是否具备领域迁移性有待进一步验证。