关键词： 抗p185^c-erbB-2/neu基因工程抗体   紫杉醇   凋亡   AKt/NF-κB途径   恶性乳腺癌  

摘要： 目的探讨抗p185c-erbB-2/neu基因工程抗体增强化疗药物紫杉醇诱导p185高表达的人恶性乳腺癌细胞系SKBr3凋亡的效应及其机制。方法采用MTS法检测基因工程抗体、紫杉醇及两者联合对SKBr3细胞增殖的抑制作用;用AnnexinV-FITC/PI法和流式细胞术定量分析SKBr3细胞的凋亡率;用Western blot技术分别检测AKt的Ser473位点、NF-κBp65亚基的磷酸化水平;用EMSA分析SKBr3细胞核内NF-κB与DNA的结合活性。结果基因工程抗体可增强紫杉醇对SKBr3细胞增殖的抑制作用,并可诱导细胞凋亡;基因工程抗体联合紫杉醇并可显著抑制SKBr3细胞中AKt/NF-κB途径。结论紫杉醇诱导乳腺癌细胞SKBr3凋亡的同时,可能通过激活AKt/NF-κB途径使癌细胞对紫杉醇产生耐药性。抗p185c-erbB-2/neu基因工程抗体联合紫杉醇是通过抑制AKt/NF-κB途径而增强紫杉醇诱导癌细胞凋亡的作用。

关键词： 猪链球菌2型   基因工程疫苗   免疫原性   免疫保护  

摘要： 猪链球菌2型引起的链球菌病是一种重要的人兽共患传染病。目前对于猪链球菌病的预防主要依靠灭活疫苗,而灭活疫苗对于同源菌的攻击保护率仅在70%左右,对异源菌的攻击保护率更低。目前对于猪链球菌2型基因工程疫苗的研究主要有两个方面,一是对某些毒力因子缺失的基因缺失疫苗的研究,由于尚未发现猪链球菌2型的标志性毒力因子,因此这方面的研究尚不太多;二是对基因重组亚单位疫苗的研究。随着分子生物学技术的发展,许多学者对猪链球菌2型的具有免疫原性的一些蛋白片段进行分析、重组、表达,以期制造出可以对猪链球2型进行有效预防的基因工程疫苗。由于猪链球菌2型的毒力因子复杂,对其毒力因子及其基因组成的研究尚不彻底,随着研究的深入,如在基因工程疫苗方面取得突破性进展,对于猪链球菌2型引起的链球菌病的预防与控制必将有着重要意义。

关键词： 基因工程表达   结核血清抗体   抗原检测   结核杆菌   临床应用   斑点金免疫渗滤试验   活动性肺结核病人   快速诊断试剂盒  

摘要： 现市场上供应的结核快速诊断试剂盒中应用的抗原均从结核杆菌中提取[1～3].目前我国城市人口中的大部分人均接受过卡介苗的注射,因此有部分假阳性存在.尤其刚接种不久的人群中假阳性率更高.本文应用基因工程表达结核抗原A60,将其应用斑点金免疫渗滤试验[4]以检测结核血清抗体.对活动性肺结核病人、正常人及非结核性病人的血清标本用该方法进行检测,现将结果报道如下.

关键词： 细胞遗传学   变异   基因工程育种   复习   分子遗传学   减数分裂   受精作用   细胞分化  

摘要： 遗传与变异是高中生物学的主干知识,涉及减数分裂、受精作用、细胞增殖和细胞分化等细胞遗传学的知识,同时包含基因的结构、功能等分子遗传学的知识.该部分内容不仅理论上具有较强的综合性,而且具有较强的实践性,能为遗传病的预防、诊断、治疗,杂交育种、诱变育种、基因工程育种等问题的解决提供一般理论性指导,因此成为历年高考能力测试的重要载体.

关键词： 必特霉素   航天空间育种   基因工程菌   微生物育种   营养缺陷型  

摘要： 探讨航天技术对必特霉素基因工程菌的育种效果。我国返回式搭载卫星对基因工程必特霉素菌种进行了航天育种，共搭载4个菌株以沙土、甘油、斜面等不同方式，经受航天环境条件处理后计算其孢子存活率、营养缺陷型出现率及菌株的发酵效价。在本实验条件下菌株的存活率均很低，尤其是沙土方式的致死率为100％，甘油及斜面孢子的致死率分别为99．79％～100％和99．81％～100％。营养缺陷型出现率为1．65％。存活菌株的负突变率高于正突变率。经筛选从408株正突变株获得了发酵效价提高11．3％～14．5％的菌株。航天技术有可能应用于基因工程必特霉素的育种，但适于其育种的空间条件必须经过详尽而细致的研究和控制。

关键词： 基因工程抗体   产业化   蛋白质分子   人体免疫系统   病原体   生物导弹   毒素蛋白   肿瘤细胞  

摘要： 抗体是人体免疫系统针对侵入的病原体或外来分子而产生的一种蛋白质分子。每个人身上可以产生109种不同特异性的抗体分子。所谓特异性是指每种抗体只与它所针对的抗原（病原体、蛋白质、糖类等）结合。由此导致抗体具有另一种特性，即靶向性：例如，注射入体内的抗肿瘤抗体能集中到相应的肿瘤部位，这种特性俗称为“生物导弹”。抗体还有第三个特性，也就是载体性：可以在抗体上连接核素、毒素蛋白、药物等杀伤肿瘤细胞或病原体。

关键词： 肝细胞生长因子受体   噬菌体抗体库   亲和力成熟   内化抗体  

摘要： 应用噬菌体展示技术制备抗Met(HGF受体,一个与肿瘤发生、侵袭和转移相关原癌基因产物)特异性、高亲和力的全人Fab片段.Fab基因分三步合成,以从错配PCR突变库中筛选出的Fab基因可变区为模板,扩增VH和VL基因,分别与CH1、CL基因融合,合成Fd和L基因,再拼接合成Fab基因,克隆于pComb3XSS中,构建Fab次级抗体库.经细胞筛选和固相筛选,获得高亲和力阳性克隆.工程菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和蛋白质印迹分析,在25ku和27ku出现预期大小蛋白质条带.Fab分子经流式细胞术、免疫沉淀、细胞免疫荧光检测,结果表明,Fab能够与S114和MKN45细胞膜上的Met胞外区特异性结合,而与阴性细胞NIH3T3不结合.抗体内化分析显示,Fab能够与标记肥皂草毒素(ZAP)的抗人IgG结合,并进入细胞内,抑制Met阳性细胞的生长,揭示该抗体能够与Met特异性结合,并且被细胞内化.该抗体有望成为肿瘤临床诊断或治疗的候选分子.

关键词： 抗tmsAs   Fab段   表达   复性  

摘要： 目的高效表达是基因工程抗体走向临床的关键问题之一。本试验旨在研究人源抗HBs基因工程抗体在***中的高效表达与折叠。方法本实验将抗HBsAg抗体的轻链(L)和重链Fd段基因,分别克隆于pET20b质粒中并分别转化到大肠肝菌BL21(DE3),IPTG诱导后,SDS-PAGE分析发现在Mr27000(L)和Mr25000(Fd)处有外源蛋白表达,表达蛋白含量分别为53%和48%。L链和Fd包涵体蛋白经盐酸胍变性后,等量混合于折叠液中。结果L和Fd可复性形成了Mr约50000的蛋白,ELISA结果表明,复性蛋白具有与HBsAg结合的能力。结论抗HBsAg抗体Fab段在大肠杆菌中的表达与复性的成功,表明包涵体表达基因工程抗体在技术是可行的。

关键词： 基因工程疫苗   猪口蹄疫   中国科学家   复旦大学生命科学院   自主知识产权   国际领先水平   商业化生产   科研人员  

摘要： 复旦大学生命科学院郑兆鑫教授等科研人员经过22年的艰苦探索、反复试验，研制成功具有自主知识产权的猪口蹄疫O型基因工程疫苗，并在上海通过成果鉴定。评审专家一致认为，该项技术成果居国际领先水平，是国内外首先研制成功的可应用于商业化生产的猪口蹄疫O型基因工程疫苗，并获得农业部颁发的“一类新兽药注册证书”。

关键词： 活载体疫苗   表达载体   基因构建   重组杆状病毒   强毒株   表达产物   保护率   蛋白免疫   昆虫细胞   阳性血清   诊断血清   基因替换   禽痘病毒  

摘要： 目前,由于IBV毒株的变异和超强毒株的出现,使得该病的防治出现困难。随着分子生物学技术的发展和日趋完善,国内外学者致力于研究开发新型的重组亚单位疫苗、重组活病毒载体疫苗、核酸疫苗和转基因植物疫苗等IBV基因工程疫苗。