关键词： GPV   原核表达   细小病毒感染   应用   多肽   重组   序列   基因工程疫苗  

摘要： 鹅细小病毒感染(Goose parvovirus infection,GPVI)俗称小鹅瘟(Gosling plague,GP)或Derzys's病,在世界养鹅国家持续不断,始终未能得到有效控制.其原因相当复杂,除了长期以来缺乏科学的免疫程序和安全的基因工程疫苗外,在一定程度上与缺乏有效的检测方法有关.GPV全毒苗在预防鹅细小病毒感染方面曾发挥了重要作用,但其最大的缺陷是对GPV感染抗体与GPV全毒苗免疫抗体无法进行鉴别,导致对感染病例无法检出,无法进行疫情监测及流行病学调查.因此,对该病进行免疫的地区无法采用血清学方法进行诊断,只能根据临床症状、病理变化等进行初步诊断[1].而在对小鹅瘟临床病例和人工感染试验中发现,有相当一部分病例缺乏明显的临床和病理学特征,难以做出诊断.因此,应用GPV VP3保护性基因工程疫苗既能预防该病,又能应用VP1-VP3非重叠序列编码产物对野毒感染抗体进行有效鉴别.本试验研究的目的是应用GPV衣壳蛋白核苷酸VP1-VP3区段非重叠序列重组原核表达多肽作为包被抗原,建立鉴别GPV抗体及VP3保护性基因亚单位抗体的间接-ELISA及DotELISA方法,经实践应用效果满意.

关键词： 犬细小病毒   核酸疫苗   原核表达   基因工程疫苗   免疫应答  

摘要： 犬细小病毒(CPV)分类上属自主复制的细小病毒科(Parvoviridae)，细小病毒属(Parvovirus)，是多种猫科和犬科动物的重要病原。本文从患犬细小病毒病的犬肠道、心脏、肺和肝制备病毒液，用感染了病毒的细胞提取病毒基因组做模板，并根据Genbank数据库公布的同源序列设计了特异性引物，采用PCR方法扩增出了目的片段，将PCR产物测序和分析，证实获得犬细小病毒新强毒株CPV-HN3的VP2基因。VP2基因中仅有一个开放读码框(Open Reading Frame，ORF)编码VP2蛋白，是犬细小病毒的主衣壳蛋白，推测编码548个氨基酸。此开放读码框以ATG为起始密码子，终止密码子为TAA。编码区全长1755bp，GC含量35.78％，由584个氨基酸组成，分子量为64.5kDa。根据同源性比较和系统进化分析，CPV-HN3属于CPV-2b型成员。\n 将CPV-HN3的CPV-HN3的VP2基因，连接到真核表达载体pcDNA3.0载体上，构建了核酸疫苗pcDNA-VP2，皮下注射犬后，诱导了免疫应答反应，犬血清中的特异性抗犬细小病毒抗体可达1：12800，在攻毒实验中，注射核酸疫苗pcDNA-VP2的犬能抵抗住致死剂量的犬细小病毒攻击，发病率和死亡率都为0，证明了核酸疫苗pcDNA-VP2可做为犬细小病毒疫苗的候选者。\n 将CPV-HN3的CPV-HN3的VP2基因进行定点突变后，连接到原核表达载体pMAL-c2x上，构建了重组表达载体pMAL-c2x-VP2，将其转化大肠杆菌TB1进行融合表达，融合蛋白分子量约为107kDa。经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定，证实了重组大肠杆菌表达了犬细小病毒VP2蛋白，表达的融合蛋白主要以可溶形式存在，经亲和层析纯化蛋白，纯化度达90％以上。将纯化的融合蛋白免疫新西兰兔子，血清中特异性抗犬细小病毒抗体效价达1：32000，中和抗体效价达1：320.

关键词： 非洲菊   植株再生   基因工程  

摘要： 对近几年来非洲菊植株再生和基因工程育种的研究进展和成果进行了总结,同时对非洲菊不同外植体材料和培养基配方的进展进行了探讨.近年来,不断发展的基因工程技术已经成为花卉育种研究的热点,解决了一些传统育种工作中不能突破的问题,它为非洲菊性状改良提供了全新的思路,主要介绍了这一技术在非洲菊花色、花型和增加抗性等方面的应用概况.

关键词： 球虫病   鸡   重组抗原   基因工程疫苗  

摘要： 鸡球虫病是严重危害养禽业的一种寄生虫病。长期以来主要以化学药物进行防治。但由于球虫抗药性和药物残留等问题日益严重,使得新药开发和应用受到限制。在免疫学中强毒活苗应用广泛但生产费用昂贵,从而促使我们转向对重组亚单位疫苗的研究。不同种类的球虫有较为严格的寄生部位。且不同发育阶段的球虫其免疫原性和抗原构成也有很大差异。在真核寄生生物中,由于受到宿主免疫系统的限制,选用鸡球虫免疫保护性抗原做重组疫苗目前还没有很大突破,因此我们需要采用新方法发现新抗原,有效防治鸡球虫病。

关键词： 基因工程疫苗   禽流感   分子生物学技术   烈性传染病   A型流感病毒   动物疫病   正粘病毒科   国际兽疫局  

摘要： 禽流感是一种严重危害畜牧业和人类健康的烈性传染病，它是由正粘病毒科A型流感病毒引起的全身性或呼吸器官性传染病，该病被国际兽疫局列为A类动物疫病，我国也将其列为一类动物疫病。多年来在世界上许多国家和地区都发生过此病，造成了巨大经济损失。随着科学技术的发展，特别是分子生物学技术的进步，使人们可以在分子水平上对禽流感进行研究，

关键词： 荧光原位杂交   染色体   基因工程  

摘要： 荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)在植物的研究中已被广泛应用,它是20世纪80年代发展起来的一种非放射性原位杂交技术,是将特定的DNA序列定位在染色体或染色质上的一门新兴的分子细胞遗传学方法。该技术的灵敏度和准确性较高并且安全、直观。本文简单介绍了该技术的基本原理,重点从染色体制片、探针标记技术、染色质的凝缩程度、与分带技术相结合和单拷贝或低拷贝基因的检测等方面,阐述了近些年该技术的发展状况,最后本文概述了该技术在基因工程育种中的应用,并展望其应用前景。

关键词： HIV-2   抗体   单克隆   酶联免疫吸附测定  

摘要： 目的制备稳定产抗人类免疫缺陷病毒-2gp36基因工程抗原单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb,单抗)的杂交瘤细胞株及相应单抗,鉴定细胞株的生物学特性和单抗的免疫学特性及理化特性;初步探索用所制单抗构建检测gp36酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的适用性。方法分别用杂交瘤技术和常规免疫制备抗gp36的单抗和多抗(polyclonal antibody,PcAb,多抗)。纯化单抗和多抗,并标记辣根过氧化物酶。分别用纯化的单个单抗-单个单抗或单个单抗-多抗建立夹心ELISA。结果获得9株稳定分泌抗gp36单抗的杂交瘤细胞株。用纯化的8E5单抗和辣根过氧化物酶标记的多抗建立的夹心ELISA可以检测到低至50μg/L的gp36。结论为人类免疫缺陷病毒-2感染的检测和研究初步提供了可资应用的单抗。

关键词： 玉米   基因工程   遗传育种  

摘要： 综述了基因工程在玉米遗传育种中的研究进展,介绍了转基因的应用领域及常用的转基因技术,在分析了基因工程在玉米遗传育种中应用限制因素的基础上,对其应用前景进行了展望。

关键词： DNA   shuffling   基因工程疫苗   定向进化  

摘要： DNA shuffling技术是一项全新的体外人工进化模式,它通过基因在分子水平上的重组,再定向筛选具有预期性状的突变体,获得同时具有多个亲本基因的特征的突变基因。该文介绍DNA shuffling技术的基本原理,并列举了由该技术发展而来的新技术及其在基因工程疫苗领域的应用,展望了DNAshuffling技术的发展方向。

关键词： 甘草酸   异戊烯基腺嘌呤核苷   ELISA   试纸条   基因工程抗体   scFv   免疫检测  

摘要： 本研究制备了甘草酸和iPA单克隆抗体，并以单克隆抗体为材料对免疫学技术中(免疫检测技术和基因工程抗体技术)进行了研究。主要结果如下：\n (1)制备了甘草酸单抗，效价为2～4×10<\'4>，亲和常数为1.00x10<\'9>L/mol，抗体为IgGl，轻链为к型。以单抗为基础建立了50%加样量的icELISA(样晶占反应体系的体积比为50%)，IC50和检测范围分别为1.1 ng/mL和0.2 ng/mL～5.1 ng/mL，比Shan等建立的基于甘草酸单抗的免疫检测方法灵敏度提高了约20倍。\n (2)制备了iPA单抗，效价为1.6～3.2x10<\'4>，亲和常数为2.67x10<\'9>L/mol，抗体为IgG2a，轻链为九型。以单抗为基础建立了50%(v/v)加样量的iPA icELISA，IC50和检测范围分别为7.1 ng/mL和 1.7 ng/mL～30.5 ng/mL。\n (3)在国内外首次提出了简化icELISA，其步骤为：包被，封闭，依次加入游离抗原、酶标二抗和抗体，显色。与常规icELISA相比，简化的icELISA的不同是游离抗原、酶标二抗和抗体同时加入，减少了一个步骤和一次洗板，检测时间至少减少了30 min。与加样量相同的常规icELISA相比，灵敏度提高了1.2～1.4倍。\n (4)基于甘草酸和iPA单抗分别建立了简化icELISA，甘草酸简化icELISA的IC50和检测范围分别是5.3 ng/mL和1.2 ng/mL～23.8 ng/mL，iPA简化icELISA的IC50和检测范围分别是21.2ng/mL和2.8 ng/mL～161.6 ng/mL。与加样量相同的常规icELISA相比，甘草酸icELISA的灵敏度提高了1.02倍：iPA icELISA的灵敏度提高了1.