关键词： 基因工程疫苗   人兽共患病   动物疫苗   畜牧业   传染病   人类  

摘要： 人类自1796年第一次成功使用疫苗到现在已经制备了近60余种不同的疫苗(表1),这些疫苗使人类最终免除了天花的灾难,同时每年还使数以百万的人免遭多种疫病的侵害.在预防兽医方面,注册使用的疫苗就有2000多种.

关键词： 副溶血弧菌   革兰氏阴性菌   外膜蛋白   免疫保护   基因工程疫苗   Western-blotting   分子克隆  

摘要： 弧菌是革兰氏阴性菌的一种主要类群，所引起的危害已引起学者们的极大关注。其中副溶血弧菌是当前危害最为严重的一种，可导致人畜共患，且在全世界范围内广泛分布。因此，研制针对该类致病菌的疫苗是当前生物防治的重点之一。革兰氏阴性菌外膜蛋白在感染时介导着与宿主的相互关系，是决定宿主免疫反应的重要因素，故系统研究其的免疫保护性，对基因工程疫苗的研制具有重要意义。\n 本文采用分子克隆和免疫学等现代生物学技术，以副溶血弧菌的外膜蛋白为研究对象，通过克隆、表达、和纯化获得26个副溶血弧菌的重组蛋白。将其中的22个蛋白免疫新西兰兔得到效价大于1∶3000的相应抗血清，为后续的免疫评价和功能研究奠定了基础。\n 通过被动免疫试验，初步评价了20种副溶血弧菌外膜蛋白抗血清的免疫保护作用。结果发现有10种蛋白的血清保护率高于50％，分别为VP2212 (50％)，VPA0860 (60％，P<0.05)，VPA1435 (50％)，VP0449 (60％，P<0.05)，VP1061(60％，P<0.05)，VP0760(70％，P<0.01)，VP1631 (50％)，VP1475 (60％，P<0.05)，putative OmpU (60％，P<0.05) 和VP2850 (70％，P<0.01)等。进一步将这些蛋白在鲫鱼体内对副溶血弧菌攻毒进行主动免疫保护作用的评价，结果发现VP2850 (80.7％，P<0.01)，VP1061 (61.4％，P<0.05)，VP0760 (80.7％，P<0.01)，VPA1435 (58.4％，P<0.01) 和OmpU (58.4％，P<0.01)等5个蛋白的免疫保护力较强，具有显著差异。将免疫保护力在60％以上的VP2850、VP0760和VP1061以鲫鱼和小鼠为动物模型对溶藻弧菌、荧光假单胞菌和嗜水气单胞菌进行交叉免疫保护作用的评价。结果发现，在鲫鱼的交叉保护评价中，3种蛋白对溶藻酸弧菌的保护率依次为VP2850 (83.3％,P<0.01)、VP1061(75％,P<0.05)和VP0760 (68.8％,P<0.05)；对荧光假单胞菌的保护率依次为VP2850(93％,P<0.01)、VP1061 (87.4％,P<0.01)和VP0760 (89.5％,P<0.01)；对嗜水气单胞菌的保护率依次为66.7％ (P<0.05)、84％ (P<0.01) 和160％(P<0.05)。在小鼠的交叉保护作用评价中，VP2850对溶藻酸弧菌、荧光假单胞菌和嗜水气单胞菌的保护作用依次为71.4％(P<0.05)，70％(P<0.01)和71.4％(P<0.05)；VP1061对三种菌的保护率依次为52.4％，55.6％，52.4％(均P<0.05)；VP0760则依次为52.4％，55.6％和68.3％ (均P<0.05)。因此，可以认为VP2850在种属间的保护作用最好。进一步对上述3个蛋白的含量和对宿主免疫的反应等有关生物学特性进行研究。结果发现，VP1061、VP0760和VP2850在副溶血弧菌膜蛋白月桂酰基肌氨酸钠非可溶性部分的所占的比重依次为1.6％、2.4％和0.6％，其含量受血清和特异性抗血清的调节。同时发现，特异性抗VP0760和VP2850兔血清与相应抗原的结合可以被鱼抗副溶血弧菌免疫血清所阻断，提示这些蛋白是鱼类良好的免疫原。\n 副溶血弧菌具有4个OmpA (VPA0248，VP0764，VP0636与VPA1186)，仅VPA1186已包括在上述基因中。为对这些名称一致的蛋白质的保护原性有比较清楚的了解，特对其进行了免疫攻毒保护作用的评价。结果表明，其保护性有一定差别，以VPA0248的保护率为最高(55％，P<0.

关键词： 蝴蝶兰   组织培养   基因工程育种  

摘要： 综述了利用种子、花梗芽作为外植体通过愈伤组织、体细胞胚P、LB、原生质体途径再生植株技术以及基因枪和农杆菌介导的遗传转化体系建立的研究成果。

关键词： 可变区基因   堆型艾美耳球虫   轻链   基因工程抗体   制备   单抗   异性   重链可变区  

摘要： 单链抗体是一种新型的基因工程抗体[21]由抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)通过一段短肽(Linker)连接而成,其分子质量小,结构简单,较亲本抗体免疫原性低,但却较好地保持了亲本抗体的抗原亲和活性.

关键词： 激光   林木   园艺植物   催芽   诱变育种   基因工程  

摘要： 激光具有极高的功率密度,因而可被应用于种子催芽和诱变育种,可作为林木和园艺植物育种和基因改良的新技术手段。文章从四个方面进行了探讨:(1)激光辐照的生物效应机理;(2)激光在林木和园艺植物种子催芽中的应用;(3)激光在林木和园艺植物诱变育种中的应用;(4)激光在林木和园艺植物基因工程中的应用。

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征   灭活疫苗   弱毒疫苗   基因工程疫苗  

摘要： 猪繁殖与呼吸综合征是一种引起母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状及高死亡率的传染病。在世界包括中国在内的各养猪国家广泛流行,造成严重经济损失,受到国内外学者的高度重视,对此病的研究特别是对其疫苗的研究正日益受到关注。文章就猪繁殖与呼吸综合征病毒的灭活疫苗、弱毒疫苗和基因工程疫苗的研究进展做了详细的阐述。

关键词： 噬菌体抗体库   单链抗体   食管癌   基因工程抗体  

摘要： 目的制备全人源化食管癌单链抗体scFv基因文库。方法取食管癌病人癌肿周围淋巴结作为B细胞的来源,提取总RNA,用RT-PCR的方法获得抗体可变区基因cDNA文库。首先分别网格筛选确定扩增VH和VL基因片段的引物对,以cDNA为模板扩增VH和VL基因片段,再以它们为模板分别扩增VH-linker与VL-linker,用SOE-PCR技术将它们拼接成scFv,再引入酶切位点SfiI和NotI,胶回收PCR产物获得scFv。将scFv基因克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E后电转入EcoliTG1。PCR法鉴定抗体基因插入率,1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆酶切产物。结果食管癌周围淋巴结的提取总RNA琼脂糖电泳结果中可见清晰的28S、18S条带;VH基因的大小约为450bp,VL基因为350bp,组装后的scFv基因约为850bp。PCR连接产物的转化效率为2×107cfu/μg,scFv的阳性插入率为91.7%(22/24)。结论食管癌相关的人源单链抗体基因文库的构建为进一步筛选单链抗体库奠定了基础。

关键词： 呼吸道合胞病毒   噬菌体表面表达   人源基因工程单克隆抗体  

摘要： 目的采用噬菌体表面呈现和重组抗体技术构建人噬菌体抗体基因库，筛选获得人源抗呼吸道合胞病毒（RSV）Fab段基因并在原核细胞中表达。为研制安全、有效的预防和治疗RSV感染的制剂奠定基础。方法从RSV感染患儿恢复期外周血淋巴细胞中提取细胞总RNA，用一组人IgGF出特异性引物，通过RT—PCR扩增得到一组轻链（κ和λ）和重链Fab段基因，并将此轻链和重链基因片段克隆于pComb3噬菌体载体，电转化XL1-Blu菌构建成抗RSV噬菌体抗体基因库。用纯化病毒颗粒作抗原对此抗体库进行了富集筛选，得到了特异性针对RSV的人源单克隆抗体Fab段基因，并在大肠杆菌中获得有效表达。用ELISA方法检测了此Fab抗体的抗原特异性，并对阳性克隆进行了基因序列分析。结果所构建的抗体库库容为108，从此抗体库中筛选得到的阳性克隆所表达的Fab抗体能与RSV纯化抗原特异性结合，保留了对RSV的抗原特异性。核苷酸序列分析证实，所获得的阳性克隆基因为人源IgG基因。结论本实验获得了特异性抗RSVFab抗体基因并在大肠杆菌中获得表达，表达产物能与RSV抗原特异性结合。

关键词： ILTV   疫苗   毒株   毒力   病毒粒子   囊膜   菌苗   毒性   病毒体   外源基因   泡疹病毒   疱疹病毒   基因结构  

摘要： 　　鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis Virus,ILTV)隶属于疱疹病毒科仪α-疱疹病毒亚科,病毒粒子呈球形,有囊膜,直径为195～250 nm,根据其颗粒的大小又可分为大囊膜颗粒(直径180 nm左右)和小囊膜颗粒(直径150 nm左右).核心缠有DNA的纤丝卷轴,纤维末端固定于衣壳下侧,衣壳为正20面体,由162个长形中空壳粒组成,每个角上有5个壳粒,共有12个五邻粒,150个六邻粒.衣壳周围常有一层无定形的致密物质,称为皮质,皮质外有膜包被,为典型的类脂双层膜,其上有短的纤突.……

关键词： 基因工程疫苗   快速检测试剂盒   猪繁殖与呼吸综合征   兽用   华中农业大学   快速检测技术   基因缺失疫苗   诊断试剂盒  

摘要： 华中农业大学陈焕春院士等研制出预防和控制畜禽重大疾病的常规疫苗和基因工程疫苗，建立了禽流感快速检测技术及诊断试剂盒。研制的伪狂犬灭活疫苗、基因缺失疫苗、猪繁殖与呼吸综合征DNA疫苗和猪蓝耳病疫苗等疫苗以及乳胶凝集反应、