关键词： 鸽毛滴虫   定量检测   黏附蛋白   基因工程疫苗  

摘要： 为了摸清广东省鸽毛滴虫的感染状况及流行规律，2006年4～5月间采用直接镜检法对广东省省内12家鸽场1739只鸽子进行了抽检，检出带虫鸽1167只，带虫率67.1%，其中乳鸽、青年鸽、产蛋鸽的带虫率分别为75.1%、71.7%、51.7%，与2003年调查的结果(65.8%、75.5%、70.2%、51%)无显著差异(p>0.05)，乳鸽与产蛋鸽的带虫率呈正相关。将鸽毛滴虫经过人工培养扩增后，离心稀释后涂片，自然干燥、分别用福尔马林、甲醇、乙醇和火焰等5种方法固定虫体，对活体及固定片分别用瑞氏染液、吉姆萨染液、伊红溶液、碘酒等进行染色。结果表明：甲醇固定效果最好；活体染色以伊红效果最好，滴虫形态完整，结构清晰，虫体呈浅紫红色在溶液里游走，容易辨认；涂片时虫体密度以1～2×106个/mL最好；固定片染色的效果均不理想。将鸽毛滴虫人工培养扩增后，以甘油和二甲基亚砜作为保护剂，在不同温度下进行保虫试验，结果甘油与二甲基亚砜的保虫效果差异不显著(p>0.05);常温(18～25℃)下保存，鸽毛滴虫存活不超过8h；低温(-4℃)冷冻保存，可保存24h；-20℃下可保存5d，-80℃下可以保存1个月；液氮(-196℃)保存效果最好，半年后复苏，毛滴虫仍然存活，虽然活力下降，但对鸽子仍然有感染力，而且可以进行人工扩大培养。\n 将纯化的鸽IgG加入佐剂免疫兔，制备纯化的兔抗鸽IgG抗体；采用简易过碘酸钠法标记兔抗鸽IgG，制备兔抗鸽IgG-HRP；同时将鸽毛滴虫用超声波破碎后加入佐剂多次免疫健康鸽获取鸽抗鸽毛滴虫高免血清；然后在2×106个/mL鸽毛滴虫的抗原量下，用不同浓度的鸽毛滴虫高免血清和IgG-HRP进行Dot-ELISA试验，确定其最佳工作浓度，然后对70个临床样品进行检测。结果在2×106个/mL的鸽毛滴虫抗原量下，鸽抗鸽毛滴虫高免血清与兔抗鸽IgG-HRP最佳工作浓度分别为1：100、1：500；对70个样品进行检测，48个镜检为阳性的样品中用Dot-ELISA检测有44个呈阳性，阳性符合率为91.7%；22个镜检为阴性样品用Dot-ELISA检测有12个呈阴性，阴性符合率为54.5%；Dot-ELISA.检测的结果与镜检的结果总符合率为80%。另外，为了研制间接ELISA检测鸽毛滴虫抗体的方法，包被的鸽毛滴虫抗原密度为5×105个/mL，阳性血清以1：400倍稀释，兔抗鸽IgG-HRP工作浓度为1：500，将病原学检测阳性的72份青年鸽血清和阴性的45份青年鸽血清，用间接ELISA方法分别检测，其相对灵敏度为100％，而特异性为86.67％，准确率为94.87％。本试验成功制备了兔抗鸽IgG-HRP，建立了两种ELISA检测方法，即Dot-ELISA定性检测鸽毛滴虫抗原的方法和间接ELISA检测鸽毛滴虫抗体的方法。提取鸽毛滴虫的总RNA，逆转录合成第一链cDNA，通过RT-PCR扩增目的片段，并将其克隆到载体pMD18-T后，分别进行PCR和酶切鉴定，最后将PCR和酶切为阳性的克隆进行测序，将所得基因序列与GenBank中相应的核甘酸序列进行同源性分析比较。结果：RT-PCR扩增产物经电泳鉴定，大小约930 bp，与预期结果一致；将重组质粒分别通过PCR和酶切鉴定，结果表明成功构建了重组质粒pMD18-ap。对阳性克隆测序并分析，结果显示该基因长1032 bp，内含一个长930 bp的完整阅读框，能编码309个氨基酸，与阴道毛滴虫黏附蛋白(ap)基因ap33-1、ap33-2、ap33-3分别具有94.2%、87.3％和87.9%的相似性。可见成功克隆出T.g ap印基因序列，为进一步研究该基因的原核表达、真核表达及其重组蛋白的大量制备奠定了基础。\n 将T.g ap基因克隆至大肠杆菌表达载体pET-43.1a(+)，获得插入了ap基因的重组质粒pET-43-ap，将质粒pET-43-ap转化到表达菌BL21，然后用IPTG进行诱导，将诱导后的表达菌离心，超声波裂解后，收集可溶性蛋白并经SDS-PAGE电泳检测，可溶性融合蛋白大小约为97KDa;并且发现在6h之内诱导表达的外源蛋白表达量随着时间的增加而增加，最高表达量占细菌总蛋白浓度的40.1%。Western-blot结果表明，T.g ap基因在大肠杆菌中的表达产物可以与相应的抗体反应，在约97 kDa处有特异性条带，表明重组T.g ap具有很好的免疫原性。\n 将T.g ap基因片段和表达载体pcDNA6/HisTM A经过EcoR I与Xba I双酶切后，用T4DNA连接酶连接，再将连接产物转化到大肠杆菌DH5a，以菌液为模板进行PCR鉴定，抽提PCR鉴定阳性菌液的质粒，对其作酶切鉴定，将鉴定为阳性的克隆进行测序并与T.g ap基因序列比

关键词： 基因工程疫苗   鸡球虫病   发展简史   应用   免疫控制   抗球虫药物   禽产品品质   Edgar  

摘要： 鸡球虫病是由艾美耳属球虫引起的鸡肠道疾病，被认为是对养禽业最具危害的寄生虫病之一。多年来，抗球虫药物在球虫病的防治中发挥了十分重要的作用。但随着耐药虫株的不断产生，特别是药物残留对畜禽产品品质及人类健康和环境影响等问题日益突出，迫使学者们寻找更为安全、有效的途径来控制球虫病。因此，球虫免疫学的研究日益引起广大学者的重视。很早以前人们就注意到球虫病康复鸡对球虫的再感染有高度抵抗力，从而引起不少专家的兴趣，并对其不断研究，于20世纪50年代，Edgar研制出一种实用的球虫病疫苗，从而拉开了免疫控制球虫病的序幕。目前已经商品化的鸡球虫病疫苗有强毒苗、早熟弱毒苗和正在研制中的基因工程疫苗。本文就对其发展史做一阐述。

关键词： 益生菌   乳酸杆菌   基因工程   疫苗  

摘要： 益生菌是被人体摄入后能产生除细菌本身具有的营养以外的益生作用的一种活菌。益生菌具有多种健康功效,且具有公认的安全性,随着益生菌蛋白表达技术的成熟,以益生菌为蛋白或抗原、抗体释放载体的研究成为了新的亮点。本文以乳酸杆菌为益生菌代表,对以益生菌为载体的基因工程疫苗的作用原理、相关技术及研究近况作一综述。

关键词： 免疫佐剂   基因工程疫苗   基因工程技术   免疫应答   免疫原性   抗原性   反应类型   增强相  

摘要： 免疫佐剂是指先于抗原或与抗原同时应用,能非特异地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答,以及增强相应抗原的免疫原性或改变免疫反应类型,而本身无抗原性的物质.随着免疫学研究的不断深入和基因工程技术的迅速发展,针对不同疾病已开展了各种新型基因工程疫苗的研制,但这些疫苗普遍存在分子小、免疫原性弱、难以诱导机体产生有效免疫应答等不足,从而需要某种物质来协同这种作用,免疫佐剂就在这种情况下产生了.文章对近年来免疫佐剂的研究概况进行了综述,现介绍如下.

关键词： 鸡传染性喉气管炎病毒   TK基因   序列分析   弱毒疫苗   毒力基因   克隆   基因工程疫苗   鉴别诊断  

摘要： 鸡接种传染性喉气管炎病毒(ILTV)弱毒疫苗是预防传染性喉气管炎(ILT)的主要措施,但由于目前使用的弱毒疫苗对雏鸡仍有一定毒力,可引起潜伏性感染及疫情扩散,毒力易于返强,强弱毒无法鉴别诊断等不足,因而缺失毒力基因而保留抗原性的基因工程疫苗等新型ILT疫苗的研制势在必行.研究表明,TK基因是疱疹病毒增殖非必需基因和主要的毒力基因,在神经组织感染与潜伏性感染中具有重要作用.

关键词： 基因工程技术   彩色棉   育种   应用  

摘要： 简述了我国彩色棉相关基因的分离与克隆以及遗传转化研究进展,并提出彩色棉基因工程技术育种的发展前景。

关键词： O型口蹄疫病毒   基因工程疫苗   P1-2A3C基因   家蚕杆状病毒表达系统  

摘要： 口蹄疫是一种严重危害畜牧业生产的烈性传染病。为了促进O型口蹄疫病毒(FMDV)基因工程活载体疫苗的研制,选取O型FMDV编码序列中的衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因,插入家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组载体pVL-P1-2A3C,并与线性化病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕BmN细胞,获得重组病毒Bm-P1-2A3C。将重组病毒感染家蚕5龄幼虫,以双抗体夹心ELISA法和间接血凝方法检测血淋巴中的表达产物:目的蛋白在感染病毒后120 h的蚕血淋巴中表达量最高,抗原表达呈阳性的最大稀释倍数为1∶128。结果显示O型FMDV的P1-2A3C基因已在家蚕体内获得表达。

关键词： 减毒活疫苗   应用   基因工程疫苗   重组亚单位疫苗   制剂   微球   生物制品   免疫学技术  

摘要： 疫苗是一种用于预防和治疗传染病或某些慢性疾病的生物制品，实际生产中应用最广泛的是传统灭活疫苗和减毒活疫苗。近20年来，随着生物技术在生物制品领域应用的不断深化和发展，疫苗制造技术和免疫学技术得到迅猛发展，产生了多种新型疫苗，包括基因重组亚单位疫苗、活载体基因工程疫苗、

关键词： 毕赤酵母   高效表达   基因工程抗体  

摘要： 毕赤酵母具有原核生物易于培养、繁殖快、便于基因工程操作和高密度发酵等特性,同时又具有真核生物中蛋白正确折叠所需的细胞内环境和糖链加工系统,还能将外源蛋白分泌到培养液中,利于纯化,因此,毕赤巴斯德酵母成为近年来发展最为迅速,应用也最为广泛的外源基因表达系统。本文主要介绍了毕赤酵母常见表达载体,提高表达量的对策,以及该表达系统在基因工程抗体方面的一些应用现状。

关键词： 基因工程   杂交育种   教学   教材分析   高中生物   科学史   人教版   原理  

摘要： 1教材分析 人教版高中生物必修2前五章按照科学史的线索展开，介绍了遗传和变异的基本原理。这些内容主线清晰，逐层深入，但很少涉及遗传和变异原理在生产实践中的应用问题。第六章“从杂交育种到基因工程”则系统地介绍了遗传和变异原理在生产实践中的应用。