关键词： 猪繁殖与呼吸综合征   灭活疫苗   弱毒疫苗   基因工程疫苗  

摘要： 针对猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),主要以疫苗预防为主。常规疫苗主要有灭活疫苗和弱毒疫苗,但前者的免疫原性差,保护效果不佳;后者又发现存在毒力返强的可能性,安全性低的问题。目前学者们主要集中在对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS virus,PRRSV)基因工程疫苗进行研究。本文就PRRS的灭活疫苗、弱毒疫苗和基因工程疫苗的研究进展做详细的阐述。

关键词： 基因工程抗体   单链抗体   临床应用   免疫复合物   融合蛋白   免疫毒素   医学生物学   美国FDA  

摘要： 基因工程抗体在医学生物学研究、疾病的诊断治疗及其他方面有着广泛应用。近年来国内外学者对基因工程抗体进行了广泛的研究,涉及到抗体基因的获取、构建、表达及最后的应用。尤其是单链抗体(single chain antibody,SCA & single chain Fv,ScFv),因其具有抗原亲活性、分子量小、穿透力强、体内循环半衰期短及排除了Fc段所致的免疫复合物反应等优点,而成为基因工程抗体研究领域中的热点课题。特别是将抗体进行人源化改造、与免疫毒素连接形成融合蛋白的研究已取得突破性进展,目前已有多个人源性ScFv抗体获美国FDA的批准。笔者认为,如果能进一步提高其稳定性及表达产量,开拓免疫毒素及其它新型免疫融合蛋白的研究范围,制备出性能稳定、特异性强、亲和力高、效能多样的基因工程抗体,就可在更大范围取得更大的成绩。

关键词： 对硫磷   单链抗体   原核表达  

摘要： 用一段45个核苷酸的片段连接抗对硫磷抗体重链和轻链可变区基因片段VH和VL,获得了抗对硫磷单链抗体(single chain variable fragment,scFv)基因,构建了抗对硫磷scFv基因原核表达载体。SDS-PAGE和Western blot分析显示,该单链抗体基因能在大肠杆菌Origami 2中特异性表达,融合蛋白分子量约为28kD。用Ni-NTA金属亲和层析法对可溶性表达产物进行纯化,得到目的蛋白纯度为74.8%;ELISA反应结果证明,该单链抗体可以与对硫磷发生特异性反应。

关键词： 疫苗设计   多表位   应用   基因工程疫苗   抗原表位   氨基酸序列   病原微生物   分子识别  

摘要： 多表位疫苗(multiepitope vaccine)也称鸡尾酒式疫苗,是同时携带多个与目标抗原相关的及辅助性表位的疫苗.多表位疫苗是由基于抗原表位的氨基酸序列制备的,是近年发展起来的一种独特的疫苗设计思路,代表了一种疫苗设计的新方向,对它的研究是基因工程疫苗研究领域里的热点之一.

关键词： 甜菜   光合作用   蔗糖代谢   叶片衰老   基因工程   育种  

摘要： 对与植物光合作用、蔗糖代谢和叶片衰老有关的主要基因的功能及转基因植株的表现加以论述,以期为提高甜菜含糖率的基因工程育种研究提供借鉴。

关键词： 猪瘟疫苗   非典型猪瘟   基因工程疫苗   隐性感染   持续感染   免疫耐受   常规疫苗   诊断方法  

摘要： 目前，猪瘟流行呈现典型猪瘟和非典型猪瘟共存、持续感染与隐性感染共存、免疫耐受和带毒综合征共存等。故许多国家在发展和改进现有常规疫苗的同时，纷纷探索利用生物技术研制和开发安全有效的新型基因工程疫苗及其配套的血清学鉴别诊断方法。

关键词： 基因工程抗体   毕赤酵母   高效表达  

摘要： HER-2/neu编码产物p185是具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白,属于表皮生长因子受体(EGFR)家族成员。抗HER2人源化单克隆抗体是一种可与HER2受体胞外区特异性结合、抑制细胞增殖,使过量表达HER2受体的肿瘤细胞对细胞毒性因子更敏感的单克隆抗体,可用于治疗过量表达HER2受体的肿瘤。\n 毕赤酵母(Pichiapastoris)表达系统是一种较完善的外源基因表达系统,具有易于高密度发酵,表达基因稳定整合住宿土基因组中,能使产物有效分泌并进行糖基化修饰,培养经济等优点。目前,采用该表达系统已经成功表达了多种外源蛋白,包括一些单链抗体和抗体片段,但是对于全抗体表达的研究还很少。我们以抗HER2人源化单克隆抗体为模型,研究了全抗体在毕赤酵母中的表达情况,并对表达产物进行结构分析和活性测定。现将主要工作总结如下:\n 1.按照Genbank上报道的抗HER2人源化单克隆抗体轻重链序列以及毕赤酵母偏爱密码子,设计并合成了抗HER2人源化单克隆抗体轻链和重链的基因全序列。\n 2.得到的抗HER2人源化单克隆抗体轻链和重链的基因全序列经过酶切连接到pAO815和pPIC9载体中,构建了一系列表达载体。\n 3.制备了毕赤酵母感受态细胞,将重组表达载体通过电击转化到感受态细胞中,通过表型筛选和诱导表达实验得到抗体表达工程菌,首次在巴斯德毕赤酵母中成功实现了抗HER2人源化单克隆抗体的分泌表达,摇瓶表达水平达到53.7±2.9mg/L。\n 4.为了提高抗体的表达量.初步研究了基因整合方式、启动子、信号肽等因素对抗体表达水平的影响。结果表明.适当的基因整合方式能够有效地提高全抗体的表达量,组成型启动子GAP的表达效率与诱导型启动子AOX1相当,HSA信号肽能够明显提高重链的分泌量,最终我们选用了GAP启动子和HSA信号肽,获得了一株高效表达菌株,摇瓶表达水平达到93.4±9.1mg/L。\n 5.酵母表达的抗HER2人源化单克隆抗体能利用ProteinA亲和层析柱纯化。纯化蛋白分别进行了还原及非还原SDS-PAGE分析,PNGF酶切,WesternBlot分析以及蛋白的N端氨基酸测序,结果显示,酵母表达抗体的轻链和重链能够自发通过二硫键装配成结构正确的全抗体分子。该抗体分子的重链发生了N-糖基化,也有可能发生O-糖基化。\n 6.经过细胞活性测定,毕赤酵母表达的抗HER2人源化单克隆抗体可较明显地抑制高表达p185erbB2的细胞株的生长。这提示毕赤酵母表达的HER2人源化单克隆抗体具有结合HER2受体胞外区并抑制肿瘤细胞生长的活性。\n 本研究在毕赤酵母中成功表达了抗HER2人源化单克隆抗体,为毕赤酵母表达系统成为抗体等人用剂量较大的复杂型糖蛋白的大规模、低成本制备平台提供了基础。

关键词： 基因工程疫苗   载体   鱼  

摘要： 疫苗载体是基因工程疫苗研制过程中的一种应用极为广泛的工具。它在病原基因的表达方面显示了独特的优越性及广阔的开发和应用前景。应用疫苗载体已成功构建了多种鱼用基因工程疫苗。现就鱼用基因工程疫苗载体的研究进展进行综述,以期为新型疫苗的研制提供参考。

关键词： 噬菌体抗体库   免疫球蛋白类,Fab   白细胞介素2  

摘要： 目的利用基因工程技术制备人源性抗IL-2蛋白的可溶性Fab抗体片段,并鉴定其抗原结合活性及特异性。方法用固相化的IL-2蛋白从人天然噬菌体抗体库中筛选出表达抗IL-2蛋白Fab抗体片段的阳性克隆,酶切及连接反应构建可溶性表达噬菌粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE鉴定抗体表达情况、ELISA鉴定其抗原结合活性和特异性。结果成功筛选并表达了抗IL-2蛋白的Fab段抗体,在SDS-PAGE中形成47kD的条带,Western blot证明为抗人Fab段抗体;ELISA证实该抗体片段具有良好的抗原特异性和抗原结合活性,与牛血清白蛋白、IL-4无交叉反应。结论成功表达并鉴定了人源性抗IL-2蛋白的可溶性Fab片段,构建了一种制备基因工程抗体的有效途径,为基因工程抗体在肿瘤免疫治疗方面的临床应用研究奠定了基础。

关键词： 嵌合抗体   白念珠菌   基因工程抗体  

摘要： 目的构建抗白念珠菌人鼠嵌合抗体的真核表达载体,并实现真核表达。方法从含有单克隆天然抗白念珠菌抗体3B4可变区基因的载体pMDT-V2H和pUC-VL中PCR克隆单抗3B4的可变区VH和VL基因,依次插入含有人免疫球蛋白κ轻链恒定区基因和γ1重链恒定区基因的真核表达载体pMH-CA。经DNA序列测定正确后,电穿孔转染J558L细胞进行嵌合抗体表达,RT-PCR,ELISA方法对抗体表达进行鉴定。结果成功构建了抗白念珠菌人鼠嵌合抗体,转染真核细胞后RT-PCR显示人鼠嵌合抗体重链和轻链mRNA的转录,ELISA证实了抗白念珠菌人鼠嵌合抗体的表达以及对白念珠菌的识别。结论成功构建抗白念珠菌人鼠嵌合抗体的真核表达载体,并表达出具有结合活性的基因工程抗体。