关键词： 花色   基因工程   育种  

摘要： 综述国内外花色基因工程育种研究进展,从创造新花色、淡化原花色和加深原花色三方面分析总结其研究现状,提出花色基因工程育种研究中存在的问题和未来的发展前景。

关键词： 新城疫病毒   分子生物学特征   基因工程疫苗   禽副粘病毒   病毒囊膜   腮腺炎病毒   粒子直径   多形性  

摘要： 新城疫病毒（Newcastle DiseaseVires，NDV）属于副粘病毒科（***），副粘病毒亚科（Paramyxovirinae），腮腺炎病毒属（Rubulavirtis），禽副粘病毒I型（Avian Paramyxovirus I，APMV—I）。成熟的病毒粒子直径约为100-250nm．有囊膜．呈现多形性，囊膜上有纤突，长约8nm，病毒囊膜上的纤突为2种糖蛋白，

关键词： 细粒棘球绦虫   抗原   疫苗  

摘要： 细粒棘球蚴病（echinococcosis）是由细粒棘球绦虫（Echinococcus granulosus，艮）的中绦期幼虫寄生在人体肝、肺等脏器引起的一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病。手术及药物治疗都因其局限性而受到限制．有保护作用的疫苗将成为控制该病流行的有效工具。目前最为成功的棘球蚴病疫苗为Eg95疫苗，作者综述了细粒棘球绦虫Eg95基因工程疫苗的研究进展。

关键词： 牛结核病   家畜免疫   分枝杆菌   基因疫苗  

摘要： 牛结核病(BT)是主要由牛分枝杆菌引起的一种慢性消耗性疾病，在许多国家尤其是发展中国家仍广泛流行，该病不仅给畜牧业造成巨大的经济损失，而且严重威胁着人类的身体健康。许多国家采用扑杀结核菌素(PPD)皮试阳性牛的防制策略，取得了疾病基本控制的效果。但多数发展中国家无法承受这种扑杀措施带来的经济损失，有些发达国家还存在众多的作为自然贮存宿主的野生动物，扑杀措施也无济于事。此外PPD皮试还存在费时、费力，判定标准不易掌握及无法区分不同种分枝杆菌的感染等缺点。因此要控制牛结核病，有必要建立新型诊断方法和实施对牛、野生动物进行免疫接种的研究，然而至今仍没有一种疫苗可用于该病的预防。本研究对牛结核的诊断方法和基因工程疫苗进行了探讨。\n ⑴以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板，应用PCR扩增获得ESAT—6、CFP—10、MPT83三个目的基因片段，采用基因重叠延伸剪接技术(gene—SOEing)将ESAT—6和CFP—10基因通过(Gly4Ser)3接头连接，得到融合基因。将融合基因克隆到表达载体pET32a(+)中转化大肠杆菌BL21(DE3)后，经IPTG诱导后获得高效表达，Western blot分析可见表达的融合蛋白与牛分枝杆菌阳性血清有特异性反应，证明表达产物抗原性良好。\n ⑵以纯化的融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA方法以检测牛结核病，经阻断试验、交叉试验、重复性试验，表明该方法特异性强、重复性好，对15份PPD皮试阳性的血清和75份PPD皮试阴性的血清用建立的ELISA方法检测，结果ELISA检出阳性8份，ELISA与PPD皮试的阳性符合率为46.7%，阴性符合率为98.7%，两者总符合率为90%，且所用ESAT—6、CFP—10基因只在少数几种致病性分枝杆菌具有，而在所有BCG株中和绝大多数非致病性分枝杆菌中缺失，所以能作为鉴别诊断抗原，该法可以作为PPD皮试诊断的一个补充。\n ⑶将ESAT—6—CFP—10(EC)和MPT83基因片段克隆进pc—DNA3.1(+)载体以构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)—ESAT—6—CFP—10(简称pc—EC)和pcDNA3.1(+)—MPT83(简称pc—M)，重组质粒转染BHK细胞并用免疫荧光方法和Western blot方法检测目的基因的表达。以原核表达的EC及MPT83蛋白免疫小鼠，制备的鼠抗EC、MPT83的多抗在免疫荧光试验和Western blot中反应良好，两种方法均显示EC、MPT83基因只在重组质粒转染的细胞中得到表达。\n ⑷选用Stratagene公司的AdEasyTM XL Adenoviral Vector System，构建出腺病毒表达质粒pAd—ESAT—6—CFP—10(简称pAd—EC)、pAd—ESAT—6—IRES—CFP—10(简称pAd—EIC)、pAd—MPT83(简称pAd—M)，质粒线性化后转染AD—293细胞，10天后出现CPE，包装出的重组腺病毒Ad—EC、Ad—EIC、Ad—M，经PCR、RT-PCR、Western blot检测，目的基因存在于重组腺病毒中且都在转录水平得到表达，在翻译水平Ad—EC、Ad—M分别能表达EC、MPT83蛋白。\n ⑸以自制的DNA疫苗(pc—EC、pc—M)和重组腺病毒疫苗Ad—EIC、Ad—EC、Ad—M免疫BALB/c小鼠和豚鼠。同时设BCG、PBS、pcDNA3.1(+)、Ad—HA(含流感病毒HA的重组腺病毒)组作为对照(除Ad—EC设滴鼻、肌注免疫组、BCG皮下免疫外，其余均只肌肉注射)。ELISA结果显示DNA苗在加强免疫后均诱导产生强的抗原特异性抗体，Ad—M和Ad—EC滴鼻组也可诱导强的体液免疫，而Ad—EC肌注组可以产生体液免疫，但水平低于Ad—EC滴鼻组(P<0.05)。\n ⑹上述组免疫后检测细胞免疫水平，用MTT法进行脾淋巴细胞转化实验，结果显示SI以Ad—EC滴鼻组最高，其次Ad—M组，Ad—EC滴鼻组比Ad—EC肌注组更能刺激淋巴细胞增殖(P<0.05)。Ad—EC肌注组、pc—EC组、pc—M组与BCG免疫组无显著差异(P>0.05)。各实验组以Ad—EC滴鼻免疫组的抗原特异性的IFN—γ含量最高，与所有组差异显著(P<0.05)，Ad—M组次之，随后是Ad—EC肌肉免疫组。DNA免疫组与BCG差异不显著(P<0.05)。所有实验组免疫后的牛PPD皮试均显示没有变态反应发生，与BCG组差异极显著(P<0.01)，说明均不干扰生产中牛PPD皮试检疫结核病牛。\n ⑺本研究制备的DNA疫苗(pc—EC组、pc—M组)、重组腺病毒疫苗(Ad—EC、Ad—M)免疫效果良好

关键词： 双价抗体   基因工程   肿瘤  

摘要： 基因工程抗体技术的发展加速了单链抗体的应用,但其稳定性差,亲和力低,功能单一,体内清除过快等特点影响了它的广泛应用。双价抗体作为一种新型小分子抗体,具有双价的结合位点,能够使抗原分子上的两个表位交联或使两个分子连接,可以模拟完整的单克隆抗体的抗原抗体反应,其构建方法有亮氨酸拉链法、利用部分抗体恒定区法、连接肽法、利用双聚化结构法、knobs into holes技术等,在乳腺癌、直肠癌、淋巴瘤等的诊治方面均有很好的应用价值。

关键词： 钩端螺旋体,问号/致病力   致病机制   基因工程疫苗   抗药性,细菌   二元信号传导系统  

摘要： 钩端螺旋体(简称钩体)病是重要的人兽共患传染病之一,但其致病机制至今不明,目前也无可预防所有问号钩体血清群、型感染的通用型疫苗。细菌耐药性一直是医学微生物学和传染病学关注的重大问题之一,近年发现二元信号传导系统(TCS)与某些细菌耐药性密切相关。根据近年国内外有关研究资料,文中就问号钩体致病物质及其作用机制、相关信号传导通路及其致病意义以及TCS在肺炎链球菌对青霉素和头孢胺噻耐药性形成、结核分枝杆菌对异烟肼和乙胺丁醇耐药性影响的最新研究进展进行简要介绍。

关键词： 细粒棘球绦虫   疫苗抗原,传统   疫苗,基因工程   综述  

摘要： 棘球蚴(包虫)病又称囊型包虫病(cystic echinococcosis,CE).棘球蚴体积大,生长力强,可寄生于人畜体内许多脏器中,压迫周围组织使之萎缩和功能障碍.如果棘球蚴囊破裂,易造成继发性感染,还能引起宿主产生过敏反应,甚至死亡.是一种严重危害人类健康和畜牧业生产的人畜共患寄生虫病[1].

关键词： 基因工程抗体   抗HER2人源化单克隆抗体   毕赤酵母  

摘要： 目的:研究抗人表皮生长因子受体2(HER2)人源化单克隆抗体能否在毕赤酵母中表达,并对表达产物进行结构分析和活性测定。方法:合成抗HER2人源化单克隆抗体的全基因,构建轻重链双表达盒表达载体,转入毕赤酵母中;通过表型筛选和诱导表达实验得到抗体表达工程菌,对表达产物进行分离纯化和活性测定。结果:表达产物存在于表达上清中,摇瓶表达水平达到53.7±2.9mg/L;毕赤酵母表达的抗体的轻重链能够自发通过二硫键装配成正确的抗体结构,其中重链发生了N-糖基化;酵母表达的抗HER2人源化单克隆抗体可以抑制高表达p185erbB2肿瘤细胞SKBR-3的生长,半数有效浓度为0.17mg/L。结论:实现了抗HER2人源化单克隆抗体在毕赤酵母中的表达,为毕赤酵母表达系统成为抗体等人用剂量较大的复杂型糖蛋白的大规模、低成本制备平台提供了基础。

关键词： 活载体疫苗   减毒疫苗   沙门菌   基因工程疫苗   免疫应答反应   基因缺失苗   免疫系统  

摘要： 疫苗主要通过激发机体的免疫系统来达到防治疾病的目的。目前，疫苗主要有灭活疫苗、减毒疫苗及基因工程疫苗等。基因工程疫苗包括基因缺失苗、基因重组苗等。活载体疫苗是将胞内感染性的细菌直接用来运载目的基因进入体内，而产生相应的免疫应答反应。目前沙门菌的预防与治疗通常使用药物，但沙门疫苗研究正迅速发展，如减毒沙门菌活载体疫苗则是将减毒后的沙门菌作为载体，

关键词： 羊痘   病原学   快速诊断   基因工程疫苗  

摘要： 羊痘是以发热、全身性的皮肤损伤、痘疹和淋巴结病变为特征的一种传染性高、病死率高、分布广泛的烈性羊病毒病,是所有动物痘病毒中最为重要的一种,严重影响养羊业和国际贸易的发展。目前,国内外对羊痘的研究主要涉及病原学、诊断技术和基因工程疫苗等方面。