关键词： 基因工程疫苗   FMDV   VP1  

摘要： 为构建重组牛O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1表位疫苗,并对其免疫学活性进行研究。利用计算机模拟构象的方法筛选出牛O型FMDVVP1表位六聚体重组蛋白的最佳表位组合形式,通过PCR及基因克隆等方法构建含编码该重组蛋白基因的质粒,大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,镍亲和层析法纯化。通过间接ELISA方法初步检测该蛋白免疫豚鼠血清中的抗FMDV抗体水平;再用活病毒FMDV进行细胞中和实验和乳鼠保护实验以检测豚鼠血清中具有保护性的抗FMDV中和性抗体的滴度。结果:构建了一种编码牛O型口蹄疫病毒VP1表位六聚体重组蛋白的质粒,经诱导表达并纯化后得到重组蛋白,命名为"MIP10"。ELISA检测结果显示,MIP10蛋白免疫的豚鼠血清中含有高水平的抗牛O型FMDV抗体。细胞中和实验和乳鼠保护实验结果显示,MIP10蛋白免疫的豚鼠血清中含有针对牛O型FMDV的保护性抗体。重组牛O型口蹄疫病毒VP1表位疫苗MIP10能够在动物体内诱导产生具有保护性的抗牛O型FMDV中和性抗体,有望开发成预防牛O型FMDV感染的新型疫苗。

关键词： 微生物   菌种改良   筛选   基因工程育种   研究进展  

摘要： 从自然界筛选出来的微生物菌株往往活性比较低,耐受性比较差,不能满足工业化生产的要求。而采用新颖的诱变技术,如微波、离子注入、原生质体诱变和原生质体融合、基因工程技术等能有效改良菌种,提高菌种的活性,降低生产成本,满足工业化生产的要求。同时,构建一种简单易行的改良路线和快速有效的筛选模式是菌种改良选育的关键。

关键词： 口服霍乱疫苗   世界卫生组织   基因工程疫苗   霍乱弧菌   口服疫苗   减毒活疫苗   全菌体疫苗   不良反应  

摘要： 从1883年Koch发现霍乱弧菌至今，霍乱疫苗的研究已有100多年的历史。早期的灭活霍乱弧菌全菌苗为注射用疫苗，因保护力低，不良反应大，已停止使用。目前研制的口服疫苗，主要有灭活的全菌体疫苗及减毒活疫苗，这些口服疫苗在国内外还处于大规模的试验和论证中，世界卫生组织还未正式通过使用任何一种口服霍乱疫苗。发展有效的霍乱疫苗需要新思路，采取更灵活、更切合实际和更富有针对性的预防措施。基因工程疫苗的飞速发展为研制理想霍乱疫苗提供了强有力的理论技术支持，着眼于抗原表位的肽疫苗越来越受到关注和认可。

关键词： 病毒灭活疫苗   油乳剂灭活疫苗   亚单位疫苗   腺病毒载体   疫情   抗体水平   基因工程疫苗   油佐剂疫苗   免疫效果   亚型  

摘要： 1、H1N1全病毒灭活疫苗(SlV inactivated vaccines)在已研制的H1N1疫苗中,技术最成熟并用于生产的主要是H1NI型和H3N2亚型单价或双价H1N1全病毒灭活疫苗。其形式多为油佐剂疫苗,灭活剂一般采用甲醛或BEI。

关键词： 动物基因工程疫苗   基因工程技术   疫苗开发   畜牧养殖业   原理   畜禽健康   动物疫病   禽流感  

摘要： 在畜牧养殖业中,禽汉感、口蹄疫、蓝耳病、猪瘟等一系列畜禽重大疾病无时无刻威胁着畜禽健康和养殖业安全,而能够帮助人们战胜这些动疫病的最大功臣就是疫苗.

关键词： 基因工程   杂交育种   太空育种   人工诱变育种   子三代   转基因抗虫棉   典型例题   菌株数   难点突破   DNA   基因突变  

摘要： 第1节杂交育种与诱变育种重点讲解1.关于杂交育种典型事例高产抗病小麦的培育. (1)亲本:高产不抗病纯种小麦和低产抗病纯种小麦. (2)育种过程:用高产不抗病和低产抗病的个体杂交,从第二代中挑选高产、抗病的个体自交,下年播种再从后代中挑选高产抗病植株继续自交,如此连续自交几代后获得能稳定遗传的优良品种.

关键词： 金黄色葡萄球菌   基因工程疫苗   亚单位疫苗   减毒疫苗   卵黄抗体  

摘要： 奶牛乳腺炎是由多种因素引起的严重影响奶牛业发展的重要疾病,至今尚未有彻底解决的办法。金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳腺炎的重要病原菌,从安全、经济、高效角度出发,探索防治乳腺炎新方法,是今后奶牛乳腺炎防治研究的新趋势。同时,金黄色葡萄球菌减毒苗在动物模型上很大程度上防御了同源及异源菌株的攻击。文章从目前研究现状和最新进展趋势等方面对奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌疫苗的研究进行综述。

关键词： 猪霍乱沙门氏菌   基因工程疫苗   仔猪副伤寒   转基因生物   生物安全  

摘要： 猪霍乱沙门氏菌（Salmonella Choleraesuis）是导致2-4月龄仔猪副伤寒的主要病原，也曾是危害我国养猪业的主要疾病之一。虽然目前在我国规模化猪场已不是严重的传染病，但在农村散养户还普遍存在，造成一定的经济损失。同时，沙门氏菌污染的动物产品可使人发生食物中毒，因而具有公共卫生学意义。目前控制猪霍乱的疫苗为猪霍乱沙门氏菌C500弱毒疫苗，该疫苗是用化学方法致弱、用于预防仔猪副伤寒的弱毒疫苗株，虽具有较好的免疫原性，但具有一定的残余毒力，而且遗传背景不清，在理论上也存在毒力返强的风险。沙门氏菌作为疫苗载体已受到医学和兽医学的广泛重视，它主要优点是沙门氏菌可以经粘膜途径免疫（口服或鼻内），操作方便，对接种对象刺激小。此外，沙门氏菌为胞内侵袭细菌，能有效呈递抗原，作为基因工程疫苗载体时，能同时激发抗沙门氏菌和外源蛋白的特异性体液与细胞免疫反应，并能同时诱导粘膜免疫与全身免疫。但目前研究的沙门氏菌载体多为鼠伤寒，对猪霍乱沙门氏菌为载体的报道很少。基于以上原因，本研究室前期开展了相关研究，以猪霍乱沙门氏菌弱毒株C500为出发菌株，构建了crp（cAMP receptor protein）基因缺失基因工程菌，并证明其毒力降低，在此基础上，进一步缺失了编码天冬氨酸β-半乳糖脱氢酶（aspartate beta-semialdehyde）基因asd，构建了asd平衡致死系统，用于高效表达外源基因。研究证实，所构建的系统能成功表达外源基因，并能有效诱导免疫反应，为研制以猪霍乱沙门氏菌为活载体的新型多价疫苗奠定了基础。\n 本研究在前期工作基础上，按照农业转基因生物安全管理办法要求，扩大动物实验规模，旨在更大范围内观察和测定猪霍乱沙门氏菌C500crp\'/asd\'作为猪用疫苗的安全性、免疫原性及对周围环境的影响。\n 选择90头40日龄、90头60日龄和10头妊娠母猪作为试验猪，并将每个不同日龄猪群分别分成三组，组1接种猪霍乱沙门氏菌基因缺失株C500crp\'/asd\'/，每头份剂量2ml或含菌量为4×109CPF，组2接种C500亲本株，每头份剂量2ml或含菌量为4×109CPF，组3为空白对照组，接种安慰剂生理盐水，剂量为2ml。接种后观测记录体温变化、采食量变化和精神状况，同时于接种后第1d、3d、6d、9d、12d、15d进行粪便采集用于排菌检测，于接种后15d和130d采血用于抗体检测。每组安排5头未接种的对照猪同居混养，观察接种猪对同居混养猪的影响，从而测定接种对环境的影响。\n 抗体检测表明，接种后第15d，C500亲本株与基因缺失疫苗株的IgG抗体效价均上升，与空白对照组相比具有显著差异，证实了猪霍乱沙门氏菌C500 crp\'/asd\'基因缺失菌株保持了与C500亲本株相当的免疫原性。在试验过程中实验动物在临床上没有不良反应，试验组体温在接种前后无明显变化，体温波动小于0.5℃，与C500亲本株及空白对照组的体温变化没有差异。达90kg体重的平均日龄分别为：重组菌试验组153d，C500菌试验组154d，空白对照组152d。妊娠母猪的平均窝产仔数分别为：重组菌试验组12头，C500菌试验组11.9头，空白对照组12头，三者差异不显著。同时通过粪便排菌测定也没有发现疫苗株被外排至环境中，对同居混养猪的抗体测定也显示没有感染疫苗株。综上所述，猪霍乱沙门氏菌C500 crp\'/asd\'基因缺失菌株作为疫苗菌株的临床使用是安全有效的，对周围环境无不良影响。这对该疫苗的进一步应用及研究以猪霍乱沙门氏菌C500 crp\'/asd\'基因缺失菌株作为载体的多联疫苗奠定了重要基础。

关键词： DNA疫苗   动物体内   转染   基因工程疫苗   质粒表达载体   抗原基因   基因插入   体内表达  

摘要： DNA疫苗是一种新型的基因工程疫苗.其构建方法是将抗原基因插入到真核质粒表达载体上,转染到动物体内,使抗原基因在活体内表达,从而引起机体的免疫应答.作为一种高效的疫苗,DNA疫苗日益成为疾病防治的重要手段.

关键词： 现代生物技术   安全问题   基因工程疫苗   生物工程产品   兽用生物制品   生物工程技术   重组DNA技术   基因缺失疫苗  

摘要： 随着生物技术的不断进步与发展,生物工程产品在农业领域应用越来越多。随之带来的转基因生物安全问题也越来越引起人们的关注。生物工程技术在兽用生物制品的应用主要体现在基因工程疫苗的开发与研究。基因工程疫苗主要是指用重组DNA技术研制的疫苗,包括将保护性抗原基因在原核或真核细胞中表达的生物合成亚单位疫苗;以某些病毒或细菌为外源基因载体的活载体疫苗和通过基因组突变、缺失或插入的基因缺失疫苗;质粒DNA疫苗;现代细胞生物学技术的应用等。虽然目前世界上已经注册并正式投放市场的基因工程疫苗产品并不多,但是它代表疫苗研究的新途径,为克服一些常规疫苗的缺陷带来希望,因此越来越受到重视。生物工程技术给兽用生物制品带来的生物安全问题主要有以下几个方面:1.实验室重组DNA试验隐含的生物危害当开发基因工程疫苗时,首先也是最重要的就是要获得一个符合需要的优秀的基因工程菌(毒)株,因此也就必须进行实验室内的基因切割、连接、修饰等工作。而这些基因工程菌毒株在鉴定为无害或确定安全等级之前,都存在着可预见或潜在的生物安全因素。如某些基因工程菌毒株或基因片段带有致病基因、抗药基因等,如缺乏足够的安全意识使这些菌毒株或基因片段进入到环境中,它们一旦...