关键词： B7-2   嵌合抗体   淋巴瘤   凋亡   ADCC效应   CDC效应  

摘要： 构建B7-2人-鼠嵌合抗体基因表达质粒pIRES/ch3C8,经脂质体法转染真核表达细胞株CHO制备B7-2人-鼠嵌合抗体(命名为ch3C8)。该抗体能够识别人恶性B淋巴瘤细胞株Raji表面的B7-2分子并诱导其凋亡。ch3C8结构中来源于人Ig的Fc段可介导高效的ADCC及CDC效应。经ch3C8结合的Raji细胞接种于BALB/c裸鼠后的致瘤性消失。该抗体在B7-2相关肿瘤的生物治疗中具有潜在的应用价值。

关键词： 鸡传染性支气管炎病毒   基因工程疫苗   接触性传染病   virus   呼吸系统   消化系统   生殖系统   养禽业  

摘要： 鸡传染性支气管炎(Infectious Bronchitis IB)是由传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病,主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统。

关键词： 产肠毒素大肠杆菌   基因工程疫苗   肠毒素   菌毛蛋白   腹泻  

摘要： 产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起腹泻的主要致病菌之一,在世界范围内,每年可导致数亿人发生腹泻,尤其是发展中国家的婴幼儿和儿童。目前,世界各国通过构建新型的ETEC基因工程疫苗预防ETEC引起的腹泻。将ETEC的肠毒素基因和菌毛蛋白基因转化至无毒的受体菌中,构建出基因工程疫苗,免疫人体后可有效预防ETEC引起的腹泻。本文就ETEC的致病机理及国内外ETEC基因工程疫苗的最新研究进展作一综述。

关键词： 基因工程育种   林木育种   实验室   生物化学与分子生物学   国家发展改革委员会   分子标记辅助育种   北京林业大学   国家重点学科  

摘要： 林木育种国家工程实验室由国家发展改革委员会于2008年10月23日正式批准建设。该工程实验室由教育部主管、北京林业大学承担建设和管理，以北京林业大学林木遗传育种国家重点学科、植物学国家重点学科、生物化学与分子生物学博士点学科和细胞生物学硕士点学科为支撑学科，以林木为主要研究对象的生物育种及其产业化技术研发为目标。下设树木分子遗传与功能基因组、林木分子标记辅助育种、林木基因工程育种、

关键词： 对硫磷   链霉亲和素   四价抗体   原核表达  

摘要： 【目的】提高抗对硫磷抗体的亲和力以提高酶联免疫检测的灵敏度。【方法】本研究通过抗对硫磷单链抗体基因和核心链霉亲和素基因片段的拼接重组,获得了抗对硫磷单链抗体-核心链霉亲和素融合基因(scfv-sa),并将该融合基因(scfv-sa)插入到表达载体pET28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行原核表达,制备融合蛋白。SDS-PAGE和Western blot鉴定scfv-sa的表达,Ni+-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,并用ELISA方法测定该融合抗体的亲和力。【结果】结果表明,在大肠杆菌BL21(DE3)中该融合基因能表达出分子量约为46kDa的融合蛋白,形成了四价结构域-四价聚合抗体。ELISA测定结果表明该抗体能与对硫磷特异结合,抗体效价在1:1×106以上,亲和常数为4.25×107L/mol。【结论】制备的抗对硫磷四价聚合抗体能与抗原特异结合,与单克隆抗体相比,抗原结合位点显著增加,ELISA检测灵敏度显著提高。

关键词： 基因工程抗体   双功能抗体   CD3   CD19   淋巴瘤   免疫治疗  

摘要： 背景与目的:微型双功能抗体是基因工程抗体的一种形式,它具有两个抗原结合位点,可选择性募集效应细胞到靶细胞周围,介导特异性杀伤作用。本实验构建抗CD3/抗CD19微型双功能抗体(diabody)载体,表达纯化后测定其生物学活性。方法:用重叠PCR(overlap PCR)和PCR方法,构建抗CD3/抗CD19 diabody载体,转化感受态大肠埃希菌进行原核表达。表达产物经抗His-tag亲和层析柱分离纯化,12% SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(FACS)检测生物学活性。结果:基因重组质粒经测序证实序列正确。抗CD3/抗CD19 diabody能够在原核表达系统中进行可溶性表达。12% SDS-PAGE显示28×103和26×103各有一条带,Western blot在28×103显示有条带,与预期相符。表达产物经纯化定量可达5mg/L。FACS检测抗CD3/抗CD19 diabody可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,并能竞争性抑制HIT3a和HIT19a与上述细胞的结合活性。结论:本实验成功构建了抗CD3/抗CD19 diabody,并且能够进行可溶性表达,可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,为以后的抗体功能实验奠定了基础。

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒   灭活疫苗   弱毒疫苗   基因工程疫苗  

摘要： 简要介绍了国内外猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗、灭活疫苗和基因工程疫苗的研究进展,分析了猪繁殖与呼吸综合征疫苗研制中存在的问题和未来发展趋势,以便兽医药科技工作者全面了解猪繁殖与呼吸综合征疫苗的研发及使用现状,进而指导临床应用。

关键词： 水貂   犬瘟热   F基因   基因工程疫苗  

摘要： 为了了解水貂株犬瘟热病毒F基因工程疫苗的免疫特性,实验将真核重组表达质粒pcDNA3.1-CDVF肌注免疫日本大耳白兔进行免疫,同时设置pcDNA3.1(+)空载体、生理盐水和犬瘟热弱毒疫苗阳性对照组。间接ELISA法检测结果显示,重组表达质粒免疫在家兔体内产生了针对CDV的特异性抗体,且抗体水平随着免疫次数和免疫剂量的增加而升高,体液免疫水平显著高于生理盐水组和空载体组,但不及弱毒疫苗对照组。淋巴细胞转化试验结果表明,重组表达质粒免疫组产生了细胞免疫,但低于弱毒疫苗组。

关键词： 基因工程疫苗   病毒载体   狂犬病   重大传染性疾病   负链RNA病毒   cDNA克隆   HIV-1   传统疫苗  

摘要： 对HIV-1和HCV等重大传染性疾病传统疫苗研制的失败，让科学家们把目光转向开发新型疫苗研制策略。其中之一就是用减毒的重组病毒载体表达外源抗原来免疫，可以保护个体免受相应病原体的暴露威胁。一种新的手段就是从cDNA克隆拯救单股负链RNA病毒，这一技术为弹状病毒科成员用于疫苗载体和生物医学工具打开了一扇窗。

关键词： 生物毒素   检测技术   海洋   现代分子生物学技术   基因工程抗体   芯片检测   生命科学学院   福建农林大学  

摘要： 由福建农林大学生命科学学院承担的“海洋生物毒素的生物芯片检测、芯片研制及其监控防范研究”项目在对含有海洋生物毒素的试样进行毒素成分的提取分离的基础上，采用基因工程单链抗体、噬菌体展示以及生物淘选等现代分子生物学技术，筛选出对海洋生物毒素具有高亲和力的基因工程抗体，建立了灵敏度高、特异性强的ELISA和免疫荧光蛋白质芯片检测方法，可高通量检测多种海洋生物毒素，整个检测过程只需2h左右。