关键词： 狂犬病毒   噬菌体呈现   Fab抗体   单克隆抗体鸡尾酒  

摘要： 从具有高滴度狂犬病毒抗体的多位疫苗注射者采集外周血淋巴细胞,构建人源抗狂犬病毒Fab基因工程抗体文库。用纯化的狂犬aG和CTN株病毒颗粒富集筛选所得Fab噬菌体抗体文库,利用ELISA和间接免疫荧光法IFA鉴定所得人源单克隆抗体Fab段基因的功能特性,并通过序列测定确定所得抗体的轻链和重链的型别,成功获得11株抗狂犬病毒糖蛋白的人源单克隆Fab抗体。将其中5株人源单克隆Fab抗体的轻链和重链分别克隆入全抗体表达载体pAC-L-Fc后转染昆虫Sf9细胞,利用杆状病毒系统实现全抗体的分泌型表达。5株全抗体在体外与狂犬病毒CVS-11株的中和反应中均显示具有狂犬病毒中和活性。人源中和性抗狂犬病毒基因工程全抗体的获得为我国自行生产抗狂犬病单克隆抗体鸡尾酒奠定了物质基础。

关键词： 疫苗免疫接种   猪病   机体免疫系统   基因工程疫苗   特异性抗体   合成肽疫苗   基因缺失苗   生物制剂  

摘要： 疫苗是将病毒或细菌（包括支原体、衣原体等）减弱毒力或杀死，使其失去原有的致病性而仍具有抗原性、能刺激机体免疫系统产生特异性抗体、用于预防传染病的一类生物制剂。目前在猪病防制中普遍使用的疫苗有活苗（弱毒苗）与死苗（灭活疫苗）两大类，又可细分为单价疫苗、多价疫苗、基因工程疫苗、基因缺失苗及合成肽疫苗等。

关键词： 流感疫苗   病毒变异   灭活疫苗   基因工程疫苗   通用疫苗   核酸疫苗  

摘要： 流感病毒表面抗原频繁变异。流感曾多次发生世界性大流行，对人类社会造成沉重灾难。禽流感病毒在家禽中传播，对养禽事业造成毁灭性灾害。流感与人类共存，同流感病毒的抗争，将是一项长期艰巨的任务。作为主要防控措施的人用和禽用流感疫苗有待改进和提高。

关键词： 产肠毒素大肠杆菌   热不稳定肠毒素B亚单位   双歧杆菌   基因工程疫苗   免疫原性  

摘要： 目的观察产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic ***,ETEC)基因工程疫苗在SD大鼠中的免疫原性。方法将含ETEC抗原成分热不稳定肠毒素B亚单位(Heat-labile enterotoxin Bsubunit,LTB)的双歧杆菌疫苗给SD大鼠灌胃4次,同时设对照组,以PBS平行灌胃。采用ELISA法检测大鼠粪便上清液IgA及血清IgG抗体水平;免疫组化法检测大鼠空肠中sIgA抗体的表达;肠绊试验检测肠毒素的活性。结果免疫疫苗的SD大鼠粪便上清液中产生了IgA抗体,血清中产生了特异性的IgG抗体,肠道内产生了特异性分泌型sIgA抗体;免疫组化结果显示,随着免疫次数的增加,抗体分泌量明显增加;双歧杆菌疫苗免疫的大鼠能够抵抗LT抗原的侵袭,而对照组大鼠则出现明显的肠道积液现象。结论构建的双歧杆菌疫苗具有良好的免疫效果,可保护SD大鼠免受ETEC的感染。

关键词： 基因工程疫苗   技术   畜禽   863计划   免疫能力   免疫佐剂   科技部   安全性  

摘要： 在科技部863计划的支持下，以提高基因工程疫苗的免疫能力和安全性为目标，在畜禽基因工程疫苗和免疫佐剂技术体系建设方面取得了重要进展。

关键词： 逆转录病毒载体   基因工程亚单位疫苗   DNA疫苗  

摘要： 逆转录病毒载体是根据逆转录病毒的特性设计出的一种病毒表达载体,以其能够整合到宿主细胞染色体上并能稳定表达目的基因而被视为基因运载最有效的工具。目前广泛应用于基因治疗、外源基因表达、基因工程疫苗等方面。主要综述了逆转录病毒载体在基因工程疫苗方面的应用现状及前景,为该载体在生物医学领域方面的应用提供有价值的参考。

关键词： 口蹄疫   重组腺病毒   空衣壳   免疫原性   基因工程疫苗  

摘要： 口蹄疫(Foot-and-mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus，FMDV)引起牛、羊、猪等偶蹄动物的一种烈性接触性传染病，发病率极高，传播速度极快，尤其在猪群中能引起大范围流行，造成严重的经济损失。FMD的结构蛋白P1，包含FMDV主要抗原位点，能被3C蛋白酶裂解后自我组装成核衣壳，诱导机体产生类似于全病毒的抗病毒免疫反应。本实验的研究目的是制各携带FMDV3C、P1、P1-2A、L-P1和L-2A基因的复制缺陷性重组腺病毒，转染AD-293细胞后，具有感染能力的复制缺陷性重组腺病毒pAd-3C分别与pAd-P1、pAd-P1-2A、pAd-L-P1、pAd-L-2A共感染Vero细胞，检测3C蛋白酶是否裂解结构蛋白P1，探索是否自我组装成病毒空衣壳，为FMD基因工程疫苗的研究奠定基础。\n 表达FMDV GD株3C、P1、P1-2A、L-P1和L-2A基因的腺病毒载体的构建：分别将FMDV GD株的3C、P1、P1-2A、L-P1和L-2A基因定向克隆到穿梭载体pShuttle-CMV中，得到五株重组穿梭质粒pSh-3C、pSh-P1、pSh-P1-2A、pSh-L-P1、pSh-L-2A。序列测定结果证实目的基因的读码框正确并且已按正确方向连接进入穿梭质粒中。将此五株重组穿梭质粒分别用限制性内切酶Pme I进行线性化后，转化BJ5183感受态细胞，筛选出了pAdeno-3C、pAdeno-P1、pAdeno-P1-2A、pAdeno-L-Pl、pAdeno-L-2A五株重组腺病毒质粒。分别将其转化XL-10 GOLD感受态细胞提高质粒拷贝数，然后大量抽提重组质粒，经Pac I线性化后在脂质体介导下转染AD-293细胞。密切观察细胞状态，待细胞出现病变后，收集具有感染能力的复制缺陷性重组腺病毒pAd-3C分别与pAd-Pl、pAd-P1-2A、pAd-L-P1、pAd-L-2A共感染Vero细胞。\n 通过Western-Blotting实验表明3C蛋白酶未成功切割P1、L-P1基因，说明3C蛋白酶必须和2A基因一起才能切割结构基因P1，这与2A和3C蛋白酶对于P1多聚蛋白形成VP1、VP3和VP0是必需的的实验报道相一致，另外3C蛋白酶成功切割P1-2A、L-2A基因，产生VP1结构蛋白，推测自我组装成病毒空衣壳。小鼠免疫实验显示，共感染Vero细胞所得的病毒上清液能够刺激小鼠产生一定的抗体，为口蹄疫新型疫苗的研究奠定了基础。

关键词： 抗体   基因工程抗体   噬菌体抗体库  

摘要： 基因工程抗体是继多克隆抗体和单克隆抗体之后的第三代抗体.近年来随着生物工程技术的发展,许多基因工程抗体陆续问世,本文详细介绍了基因工程抗体的研究进展,概述了基因工程抗体在临床方面的明显优势和应用潜力.

关键词： Ⅳ型胶原酶   单链抗体   力达霉素   强化融合蛋白   生物学活性   抗肿瘤作用  

摘要： 目的研究抗Ⅳ型胶原酶单链抗体(Fv)和力达霉素辅基蛋白(LDP)在大肠杆菌表达的融合蛋白(Fv-LDP)与力达霉素(LDM)的活性发色团AE形成的基因工程强化融合蛋白Fv-LDP-AE的生物学活性及体外抗肿瘤作用。方法采用酶联免疫吸附剂测定、免疫荧光细胞化学染色和明胶酶谱分析Fv-LDP-AE生物学活性;通过MTT法、Hoechst 33342和碘化丙啶共染、DNA ladder和侵袭实验探讨其抗肿瘤作用。结果 Fv-LDP-AE对人肝癌BEL-7402和人结肠癌HT-29细胞的免疫反应呈阳性,可与BEL-7402细胞特异结合,并呈剂量依赖性抑制人高转移性巨细胞肺癌PG细胞内Ⅳ型胶原酶分泌。Fv-LDP-AE对BEL-7402和PG细胞的增殖抑制作用比力达霉素强,可诱导BEL-7402细胞裂亡、凋亡,抑制BEL-7402细胞侵袭。结论 Fv-LDP-AE是一种以Ⅳ型胶原酶为靶点的、具有高效抗肿瘤活性的抗体药物。

关键词： 基因工程疫苗   技术   畜禽   863计划   免疫能力   免疫佐剂   科技部   安全性  

摘要： 在科技部863计划的支持下，以提高基因工程疫苗的免疫能力和安全性为目标，在畜禽基因工程疫苗和免疫佐剂技术体系建设方面取得了重要进展。