关键词： 微生物凝乳酶   自然选育   诱变育种   基因工程育种  

摘要： 综述了目前我国在凝乳酶产生菌在自然选育、诱变育种和基因工程育种这3方面的研究进展情况。

关键词： 鸡新城疫   基因工程疫苗   接触性传染病   新城疫病毒   virus   鸡瘟   感染   火鸡  

摘要： 新城疫（newcastle disease,ND）又称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟,是由新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）引起的一种急性、高度接触性传染病,主要侵害鸡和火鸡,其他禽类和野禽也能感染,亦可感染人,

关键词： β-葡萄糖苷酶   诱变育种   原生质体育种   基因工程育种  

摘要： β-葡萄糖苷酶在纤维素降解方面有着重要的作用,可以把纤维二糖水解成葡萄糖。对产β-葡萄糖苷酶微生物的育种进行了概述,包括自然选育、诱变育种、原生质体育种和基因工程育种等。目前,通过基因工程手段构建工程菌或通过蛋白质工程手段改造酶蛋白,以获得高活性的β-葡萄糖苷酶已成为研究的热点。

关键词： 植物基因工程   遗传育种   限制性酶   外源DNA  

摘要： 论述了植物基因工程育种技术的突破性研究进展,对植物基因工程育种前景进行了展望,提出了若干尚待解决的问题。

关键词： 花卉育种   基因工程   发展策略  

摘要： 花卉育种是花卉业发展的基础,转基因技术在花卉育种中的应用使花卉的选育迈入了分子时代。其优点在于有目的地改变花卉的某一性状而不影响其他性状,并缩短育种周期。本文主要论述了国内外花卉基因工程育种现状及花卉基因工程研究中存在的问题,并对我国今后花卉基因工程育种的发展提出几点建议。

关键词： 基因工程小分子抗体   抗体结构   抗体功能   应用  

摘要： 利用基因工程方法构建的小分子抗体,不仅具备亲本抗体可与抗原特异性结合的特征,更因其分子量小、组织穿透性强、免疫源性低、血液清除快、可经济方便地生产等优点在疾病的诊断和治疗中凸显出重要价值。文章对基因工程小分子抗体结构、抗体功能、在动物疾病研究中的应用等方面的进展情况进行了简要综述。

关键词： 猪传染性胃肠炎病毒   基因工程疫苗   口服免疫  

摘要： 猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起猪的一种高度接触性肠道疾病,可导致仔猪发生严重的呕吐、腹泻与脱水,死亡率可达100%。口服疫苗是TGEV基因工程疫苗研究的主要方向,目前已在腺病毒、细菌、转基因植物及DNA疫苗中对TGEV的S基因进行了表达,并对其口服免疫后的免疫原性进行研究。现针对TGEV基因工程疫苗近年来研究的概况进行综述,分析其优点与不足,并对其未来的发展进行展望。

关键词： 灭活苗   禽用   家禽疫苗   应用   制配   灭活疫苗   基因工程疫苗   疫病发生  

摘要： 目前我国市场上家禽疫苗的种类非常多，有活疫苗、灭活疫苗；有单苗、联苗、基因工程疫苗等，因此如何选择和使用疫苗对控制疫病发生十分重要。禽用多联灭活疫苗是种鸡和蛋鸡养殖过程中最为常用的疫苗品种。但部分业内人士对病原越来越多的多联灭活疫产生了质疑。认为多联苗的使用虽然可以减少免疫次数、减少鸡群应激反应、节约人力和疫苗成本，

关键词： 鸡白痢   沙门氏菌   外膜蛋白C   免疫原性   抗原性   基因工程疫苗  

摘要： 鸡白痢是危害养鸡业最严重的疾病之一，世界各地不同季节均有发生，各种年龄、不同品种的鸡都可感染，病死率很高，病鸡群不易净化。目前我国对鸡白痢的主要防治方法是使用抗菌药物，但这使得细菌耐药性越来越强，耐药菌株越来越多，如何研制一种有效的疫苗控制该病，成为了国内科研人员所面临的巨大挑战。沙门氏菌是无荚膜的革兰氏阴性菌，其外膜蛋白在致病和刺激机体免疫应答方面起着重要的作用，因此细菌的外膜蛋白成为了基因工程疫苗研究和开发的热点；沙门氏菌外膜蛋C是一个重要的外膜蛋白，既可作为佐剂，又可作为免疫刺激原得到应用。\n 本研究根据GenBank中注册的沙门氏菌OmpC基因序列设计特异性引物，采用聚合酶链式反应技术(PCR)从鸡白痢沙门氏菌基因组中扩增出OmpC基因片段，大小为1168bp，将其克隆至载体pMD19-T上构建重组质粒pMD19-T-OmpC，并进行序列测定。对所测定的序列进行比较和分析，发现OmpC基因序列包含一个1137bp的开放阅读框，编码379个氨基酸。与GenBank中收录的其他沙门氏菌的OmpC基因比较，它们的核苷酸序列相似性在95.9%至98.2%之间，其推导的氨基酸序列相似性在96.8%至98.7%之间。\n 根据测定的OmpC基因序列和生物信息分析结果分别设计三对引物，以pMD19-T-OmpC为模板进行PCR扩增，构建真核表达重组质粒pVAX1-OmpC和原核表达重组质粒pET28a(+)-OmpC、pBCX-OmpC。将重组质粒pET28a(+)-OmpC、pBCX-OmpC转化大肠杆菌BL21，用IPTG诱导蛋白表达进行SDS-PAGE电泳，可分别检测到分子量约为36KD的OmpC蛋白与56KD的mysB-OmpC融合蛋白。Western-blot结果显示，OmpC蛋白和mysB-OmpC融合蛋白均能与鸡白痢阳性血清发生特异性反应，表明OmpC蛋白和mysB-OmpC融合蛋白均具有良好的抗原性。对所得蛋白进行可溶性分析，OmpC蛋白主要为不可溶性包涵体，mysB-OmpC融合蛋白主要为可溶性蛋白。将OmpC蛋白和mysB-OmpC融合蛋白分别进行纯化。\n 用制备的DNA疫苗和亚单位疫苗免疫4组SPF鸡，分别为对照组、pVAX1-OmpC质粒组、OmpC蛋白组、mysB-OmpC蛋白组，于8日龄时进行首次免免疫，首免后第10d进行加强免疫一次。于首疫前1d，首免后第7d、17d、24d对免疫鸡只进行采血，分离血清，采用间接ELISA方法和平板凝集试验检测血清抗体水平，首免后第26d进行攻毒试验。通过间接ELISA法检测各组不同天龄IgG抗体水平，对照组各天龄间都差异不显著，pVAX1-OmpC质粒组免疫后第7天与免疫前1天差异不显著，其余各组各天龄与免疫前1天相比都差异显著，第24天mysB-OmpC蛋白组抗体水平明显高于pVAX1-OmpC质粒组和OmpC蛋白组；首免后第24天，对照组、pVAX1-OmpC质粒组、OmpC蛋白组、mysB-OmpC蛋白组的血清平板凝集试验阳性率分别为0%、6%、13.3%、60%;攻毒后，对照组、pVAX1-OmpC质粒组、OmpC蛋白组、mysB-OmpC蛋白组的鸡发病率分别为为73.3%、46.6%、33.3%、13.3%。\n 结果表明，鸡白痢沙门氏菌OmpC蛋白具有较好的抗原性和免疫原性，其制作的DNA疫苗和亚单位疫苗可以产生一定的保护作用，可以为鸡白痢沙门氏菌诊断抗原和新型基因工程疫苗的制备提供一定的理论基础。

关键词： 血清流行病学   乙脑病毒   猪细小病毒   猪伪狂犬病病毒   VP2基因   抗原表位   核酸疫苗   基因工程疫苗  

摘要： 猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)及流行性乙型脑炎病毒(JEV)是引起猪繁殖障碍性综合征(SMEDI)的三大主要病毒性病原,临床上常与免疫抑制性病毒:猪瘟病毒(HCV)、猪呼吸繁殖综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)等和一些细菌性疾病等混合或继发感染,除引起严重的繁殖障碍外,更导致猪病临床症状复杂多变性,增加治疗和防控的难度,造成巨大经济损失。为节约人力简化免疫程序、降低免疫干扰、减小动物应激、鉴别疫苗与野毒,研发一种高效、稳定、安全、方便的新型疫苗来同时预防和控制好当前三种病毒病,是最大幅度降低猪繁殖障碍性综合征(SMEDI)及相关疫病行之有效的途径。PRV活载体和PPV VP2病毒样颗粒的联合应用,为发展新型动物疫苗提供了思路。本研究开展了对四川省猪场猪只RPRV和JEV的血清学调查,以掌握其流行现状;研究了密码子优化的JEV多抗原表位串联基因e与PPVVP2嵌合DNA疫苗;并以猪伪狂犬病毒疫苗株SA215为载体,构建了JEV-PPV-PRV活载体疫苗。主要研究内容如下:\n 1、四川省部分猪场伪狂犬和乙型脑炎的血清流行病学调查采用PRV gE ELISA检测试剂盒对2009年～2010年以四川省18个地区的27个具有代表性大中小型猪场不同批次送检的血清1177份进行了伪狂犬野毒的检测,并对数据进行了统计分析。结果显示,各猪场平均gE抗体阳性率为8.2%,阴性猪场占59.3%,川东北区阳性率最高为18.8%,公猪野毒感染率最高达7.4%,基础母猪规模为100头以下的小型猪场猪只伪狂犬野毒阳性率最高为52.7%。对四川省10个地区的14个猪场进行PRV gB抗体ELISA检测,结果显示,各猪场gB抗体阳性率从最低的66.7%到最高100%,14个猪场平均抗体阳性率达87%,表明四川省PRV的免疫情况参差不齐,差异较大。采用JEV抗体ELISA检测试剂盒对四川14个地区21个规模化猪场从2009年2月至2010年10月的1100份样品进行了检测,并对数据进行了统计分析,结果显示,JEV抗体总阳性率为75.1%,川西区抗体阳性率最高为83.6%,4月份抗体阳性率逐渐升高,到5月份阳性率达到第二高水平92.1%。将826份JEV ELISA检测为阳性的样品按照猪群类别分类随机抽样20%,采用JEV RT-PCR进行检测,结果显示,后备猪阳性率为6.5%最高,表明四川省猪群存在JEV感染。\n 2、乙脑E基因多抗原表位基因的设计和原核表达通过生物信息学方法对JEV E蛋白抗原表位进行了预测,结合文献报道筛选出5个B细胞表位和1个T细胞表位,为了增强细胞免疫应答引入通用辅助T细胞表位(PADRE),选取合适的接头Linker序列将各表位进行不同顺序线性串联组合,初步优化获得基于多抗原表位疫苗分子的氨基酸序列,并用生物软件对串联的乙脑多表位肽进行了分析评价。以原核表达质粒pET-32a为载体,构建了含JEV多抗原表位串联基因的原核表达质粒pET-e,经IPTG诱导成功表达,Western blot结果表明,JEV阳性血清能特异性识别JEV多抗原表位串联基因e的表达产物,表明JEV多抗原表达蛋白e具有免疫原性,为后续研究奠定了基础,以便应用于基因疫苗研制。\n 3、猪细小病毒VP2蛋白N端甘氨酸富集区的缺失对病毒样颗粒的形成及免疫原性的影响PPV VP2蛋白N端连续9个甘氨酸富集的编码区是VP3蛋白的切割位点,常规PCR扩增容易导致该区段的缺失,为研究该缺失对PPV VLPs的影响,探索VP2病毒样颗粒上适合外源基因插入的位点,笔者构建了该区段缺失的VP2的真核表达载体pCI-△VP2,并以完整VP2作为对照,采用脂质体介导法转染Vero细胞,通过生物信息学技术,SDS-PAGE和Western-boltting,间接免疫荧光以及正染和免疫电镜对表达产物进行分析观察;进一步将重组质粒以核酸疫苗的方式直接肌注免疫小鼠,采用间接ELISA试验,淋巴细胞增殖试验和T细胞亚群流式细胞技术,分析免疫小鼠的体液和细胞免疫应答。结果显示,缺失△VP2和完整VP2在Vero细胞中均能自我装配成VLPs,并具有与完整病毒粒子类似血凝性,pCI-△VP2和pCI-VP2均可诱导小鼠产生较强的特异性体液免疫应答和良好的细胞免疫应答。结果表明,甘氨酸富集区的缺失不影响VP2病毒样颗粒的装配和免疫原性,△VP2同样可进行PPV VPLs疫苗和抗原转运载体的研制,为VPLs载体改造和修饰位点的探索提供了新方向,为VP2基因结构与蛋白质功能的关系提供了新的理论依据4、密码子优化的JEV多抗原表位e与PPV VP2嵌合真核表达载体pCI-Ve的构建按照哺乳动物密码子偏爱性对JEV多抗原表位串联基因e进行了密码子优化,人工合成密