关键词： CD22   人CD22抗体   B细胞淋巴瘤   毕赤酵母  

摘要： 目的:采用酵母多拷贝分泌表达载体pPIC9K表达重组嵌合抗人CD22四价基因工程抗体cRFB4FC和cRFB4CH3,并进行活性检测。方法:采用基因克隆技术获得两抗体的基因,然后将其克隆入表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K/cRFB4FC和pPIC9K/cRFB4CH3,经测序鉴定正确,电转化入毕赤酵母SMD1163中,将经G418抗性筛选出的重组酵母菌株进行PCR鉴定,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,经ELISA检测生物学活性。采用正交试验优化重组酵母菌株的表达条件以提高抗体的表达量。结果:获得重组表达质粒pPIC9K/cRFB4FC和pPIC9K/cRFB4CH3,经G418筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母菌株,经甲醇诱导表达出cRFB4FC和cRFB4CH3蛋白。它们在SDS-PAGE上分别表现为相对分子质量(Mr)约326 000和295 000的蛋白区带,在Western blot分析中均可被山羊抗人IgG Fc单克隆抗体(mAb)识别,经ELISA分析它们都具有较高的生物学活性。优化表达条件后,抗体的表达量分别提高了196.4%和151.7%。结论:抗体cRFB4FC和cRFB4CH3在酵母菌SMD1163中成功获得高效分泌表达,并有免疫学活性。

关键词： 肝炎表面抗原,乙型   细菌噬菌体   抗体,病毒   免疫球蛋白G  

摘要： 目的研制人源抗乙肝表面抗原（HBsAg）基因工程抗体。方法采集多个HBsAg加强免疫后表面抗体阳性（HBsAb＋）志愿者的外周血，分离淋巴细胞，构建人源抗HBsAgFab噬菌体抗体基因文库。用纯化的HBsAg对抗体库进行富集筛选，经过序列测定确定抗体轻重链型别，分别克隆入真核细胞表达载体pAc—FcR和HL51—14，转染昆虫Sf9细胞和293T细胞，利用杆状病毒／昆虫细胞系统和哺乳动物细胞系统实现全抗体的分泌型表达。结果成功筛选出20株抗HBsAg的人源Fab抗体并制备出其中6株的IgG全抗体，竞争性ELISA结果显示6株全抗体针对的是HBsAg3个不同表位。结论成功筛选并获得了6株针对3个不同表位的抗HBsAg的IgG全抗体，为治疗性抗体和新疫苗的研制奠定了基础。

关键词： 紫花苜蓿   耐盐基因   耐盐生理   传统育种   基因工程育种  

摘要： 紫花苜蓿(Medicago sativa)是世界上最重要的豆科牧草之一,但盐渍化土地严重制约着其种植范围。培育耐盐新品种是降低盐渍化土地对紫花苜蓿生长和产量影响的有效途径。笔者综述了紫花苜蓿耐盐生理、盐诱导相关基因以及耐盐性育种方面的主要进展,并对紫花苜蓿耐盐性研究的前景进行了讨论。

关键词： 狂犬病病毒   免疫球蛋白类,重链   免疫球蛋白类,轻链   噬菌体  

摘要： 目的研制人源抗狂犬病毒基因工程抗体。方法从具有高滴度狂犬病毒抗体的疫苗接种者采集外周血淋巴细胞，通过pHAL14载体和高效噬菌体系统构建人源抗狂犬病毒单链基因工程抗体库，经纯化的狂犬病毒aG株富集筛选，通过ELISA和IFA鉴定阳性抗体克隆并进行序列测定。利用IgG表达载体VH／VK双质粒系统瞬时转染293T细胞实现IgG抗体的分泌型表达，通过亲和力测定和中和试验鉴定IgG抗体功能。结果成功地获得了6株抗狂犬病毒糖蛋白的人源单克隆抗体，非竞争ELISA显示6株抗体具有较高的亲和力，体外中和试验证实这6株人源单抗对狂犬病毒C^S株无中和活性，对aG株具有较强的中和活性。结论从免疫库中获得了6株人源单克隆抗体，为狂犬病毒的鉴别诊断和治疗奠定了基础。

关键词： 火鸡鼻气管炎   禽偏肺病毒   分子生物学   反向遗传   基因工程疫苗  

摘要： 禽偏肺病毒为不分节段的单股负链RNA病毒,属于副黏病毒科肺炎病毒亚科偏肺病毒属,主要引起火鸡和鸡上呼吸道系统疾病,分布广泛,严重危害养禽业的经济效益。本文简要综述禽偏肺病毒粒子的结构、理化特性、基因组构成、结构蛋白及功能、RNA转录与复制、致病性和抗原性,以及基因工程疫苗研究的进展。

关键词： 犬细小病毒   疫苗   基因工程   进展  

摘要： 从犬细小病毒病亚单位疫苗、表位疫苗、核酸疫苗、活载体疫苗等方面,论述了近年来国内外在犬细小病毒病新型疫苗研究方面的新进展,并对各种新型疫苗的优缺点及应用前景进行了讨论,为犬细小病毒病新型疫苗的研制提供理论基础。提出各种犬细小病毒病基因工程疫苗互有优劣,可以通过技术手段采用不同种类的新型疫苗的交叉组合、免疫原的集成使用等研制出更理想、更有效的疫苗。

关键词： A型口蹄疫病毒   基因工程疫苗   P1—2A3C基因   家蚕杆状病毒表达系统  

摘要： 口蹄疫是一种严重危害畜牧业生产的烈性传染病。为了促进A型口蹄疫病毒(FMDV)基因工程活载体疫苗的研制,选取A型FMDV编码序列中的衣壳蛋白前体P1-2A基因中的VP1和VP3以及亚洲Ⅰ型蛋白酶3C基因,插入家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组载体pVL-P1-2A3C,并与线性化病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕BmN细胞,获得重组病毒Bm-P1-2A3C。将重组病毒感染家蚕5龄幼虫,以双抗体夹心ELISA法检测血淋巴中的表达产物,结果显示目的蛋白在感染病毒后108 h的蚕血淋巴中表达量最高,A型抗原表达呈阳性的最大稀释倍数为1 024,而亚洲Ⅰ型抗原表达呈阳性的最大稀释倍数为2 048。结果表明A型和亚洲Ⅰ型FMDV的P1-2A3C基因已在家蚕体内获得表达。

关键词： 基因工程抗体   文献   计量分析  

摘要： 以1994～2010年的《中国期刊全文数据库》作为数据来源,采用文献计量学方法对我国基因工程抗体研究文献的数量、年份分布、文献作者、作者的合作度、作者单位、载文期刊的分布和文献主题分布进行统计分析,揭示十多年来我国基因工程抗体研究的现状和发展趋势,为我国基因工程抗体研究及信息交流提供参考依据。

关键词： 流感疫苗   细胞培养技术   佐剂   基因工程疫苗  

摘要： 流行感冒是一种发病率和死亡率很高的呼吸系统疾病,接种疫苗是预防流感的有效手段。传统的流感疫苗生产存在一些不足,需要更加迅速有效的疫苗生产技术来满足市场的需求。本文对弥补传统疫苗生产技术不足采用的一些新技术进行综述。

关键词： 鱼   基因工程疫苗   免疫方式   DNA疫苗   亚单位疫苗  

摘要： 疫苗是目前控制鱼类病害最经济有效的方式。免疫学及生物工程的迅速发展极大地促进了鱼类基因工程疫苗的研究。基因工程疫苗克服了传统疫苗的一些缺陷和不足,显示出巨大的应用前景,已成为国内外水产养殖业的研究热点,近年对鱼用基因工程疫苗的研究已取得较大进展,但鱼用基因工程疫苗在研究和应用过程中也面临着急需解决的若干问题。