关键词： 鸡新城疫疫苗   多价苗   灭活疫苗   常规疫苗   疫苗研究   核酸疫苗   Vaccine   亚单位疫苗   基因工程疫苗   活载体疫苗  

摘要： 疫苗（Vaccine）是用于预防传染病的抗原制剂,通常用钝化、弱化或无害的病原体或其产物制成,用以刺激机体产生保护性免疫力。目前,新城疫（ND）疫苗主要有弱毒疫苗、灭活疫苗等常规疫苗,重组活载体疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗、核酸疫苗等基因工程疫苗。1常规疫苗1.1灭活疫苗灭活疫苗是经处理而致死的病原体,安全性好,免疫应激反应小,一次免疫持续时间长,利于制造联合苗或多价苗。

关键词： 杨树   基因工程   育种  

摘要： 该文主要对国内外杨树基因工程育种在抗虫、抗病、抗除草剂、抗旱、抗逆、降低木质素及雄性不育等方面的研究进展进行了综述,详细介绍了各个方面近些年来的研究成果,并对杨树基因工程育种中存在的问题及发展对策进行了讨论。

关键词： 免疫佐剂   中草药   合成肽疫苗   基因工程疫苗   免疫原性   生物技术   抗原   物质  

摘要： 随着生物技术的发展,新一代疫苗包括合成肽疫苗、基因工程疫苗等新型疫苗不断涌现,但是现代疫苗研究过程中遇到的关键问题是其免疫原性弱,必须由佐剂来克服,因此免疫佐剂的研究越来越受到人们的关注。免疫佐剂也称佐剂或抗原佐剂,是一类单独使用时一般无免疫原性,但与抗原物质合并使用时能增强抗原物质免疫原性,

关键词： 灭活疫苗   种类划分   生猪   合理使用   猪传染性胸膜肺炎   生物安全体系   基因工程疫苗   仔猪副伤寒  

摘要： 合理地选择和使用疫苗,对于有计划地免疫,提高生猪对某些疫病的特异抵抗力,减少疫病的发生,构建养猪业生物安全体系具有重要意义。1猪常用疫苗的种类猪常用的疫苗有猪瘟、猪蓝耳病、猪口蹄疫、猪丹毒、猪肺病、仔猪副伤寒、猪伪狂犬、猪细小病毒、猪大肠杆菌、猪链球菌、猪传染性胸膜肺炎和猪喘气病疫苗等,这些疫苗又分为灭活疫苗、弱毒疫苗、单价疫苗、多价疫苗、联合疫苗、亚单位疫苗和基因工程疫苗等。

关键词： 肠炎沙门菌   crp   spiC   基因工程疫苗  

摘要： 目的构建肠炎沙门菌ΔspiCΔcrp双基因缺失株,以探索其作为新型基因工程疫苗的可能性。方法以等位基因同源重组方法,在构建单基因缺失肠炎沙门菌ΔspiC基础上,运用λRed重组酶系统构建双基因缺失株肠炎沙门菌ΔspiCΔcrp。结果 PCR和抗生素抗性结果表明肠炎沙门菌ΔspiCΔcrp成功构建;生物学鉴定显示,与野生菌相比,其生长速度与生化特性发生了变化,LD50提高约1 000倍,毒力显著降低。结论双基因缺失株肠炎沙门菌ΔspiCΔcrp被成功构建,为其作为疫苗的免疫学评价奠定基础。

关键词： 兽医科技   猪繁殖与呼吸综合征   文摘   畜牧   母猪繁殖障碍   PRRS疫苗   基因工程疫苗   疫苗免疫  

摘要： 猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是一种引起母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状及死亡的传染病，疫苗免疫是防控该病的重要措施之一。文章对PRRS疫苗包括灭活疫苗、弱毒疫苗和基因工程疫苗的研究概况进行了综述，旨在为该病的免疫防控提供参考。

关键词： 抗肠道病毒71型   基因工程   疫苗   单克隆抗体  

摘要： 手足口病是五岁以下儿童中常见的传染病。近几年，该病在亚太地区广泛流行，造成了严重的感染和死亡。据CDC统计，自2010年以来每年仅在中国大陆就有150-200万的感染病例。手足口病是一个严重的公共卫生问题。但是，目前仍没有有效地预防性疫苗和治疗性药物上市。\n 本文第一章主要基于病毒样颗粒(Virus-Like Particle，VLP)这种疫苗策略，围绕手足口病基因工程疫苗开展了一系列应用基础研究。肠道病毒71型(EV71)是手足口病最主要的致病原之一。EV71共有11个基因亚型(A，B1-B5，C1-C5)，中国大陆流行的是C4亚型。首先，利用杆状病毒-昆虫表达系统成功制备了C4亚型EV71毒株的VLP，并评价了它的免疫原性。研究发现EV71-VLP免疫后的抗血清对多种EV71毒株均有非常强的中和活性。接下来，初步研究了EV71-VLP免疫血清的抗病毒机制。发现免疫血清主要识别VP1上GH-loop这个在各基因亚型之间完全保守的中和表位，免疫血清在病毒吸附之前和之后均能发挥抑制作用。柯萨奇病毒A16型(CA16)是手足口病的另一个重要致病原，与EV71加起来总共导致了约80％的手足口病。因此，研究一种能同时预防这两种病毒的双价疫苗能更有效地预防手足口病。针对这一目标，本章的最后一部分开展了EV71/CA16-VLP双价疫苗的免疫原性和保护效果评价。研究发现，双价VLP疫苗免疫小鼠的血清能同时中和EV71和CA16，并且被动保护小鼠免于致死剂量的EV71或CA16的攻击;但是单价EV71-VLP或CA16-VLP疫苗的免疫血清只能保护小鼠免于同种病毒的攻击，对异种病毒的攻击没有保护效果。\n 本文第二章主要围绕EV71单克隆抗体的应用基础研究开展一系列基础应用研究。在所有手足口病的病原中，EV71导致的重症和死亡病例比例最高，分别约为80％和90％。因此，EV71特异性的治疗药物的需要尤为迫切。中和性单抗是一类极具潜力的抗病毒药物。针对这一目的，我们开展了三部分工作:(1)EV71特异性单抗的鉴定及特性分析;(2)单克隆抗体的体内抗病毒效果;(3)单克隆抗体的抗病毒机制。首先，用EV71-VLP作为免疫原，采用杂交瘤技术筛选出了3株EV71特异性的单抗D5、H7和C4。经过鉴定，这3株单抗均能有效地中和EV71并特异性地识别EV71的VP1上的GH-loop表位。接下来，在EV71小鼠感染模型上评价单抗的体内预防和治疗效果。结果表明，D5、H7和C4均能预防小鼠感染EV71;更重要的是，即使在小鼠感染EV71后的第3天，当病毒已经进入大脑且导致明显的炎症反应时，D5仍然具有治疗效果。最后，揭示了这些单抗发挥中和作用的机制。结果表明，这些单抗能抑制病毒进入细胞所必须经历的多个步骤，包括吸附以及吸附之后的内化、脱衣壳和RNA释放等过程。进一步的研究发现，单抗能阻止病毒与多个重要受体的结合，从而揭示了这种多重抑制的分子机理。

关键词： 基因工程   抗体制备   布尼亚病毒   Gn蛋白   功能鉴定  

摘要： 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopeniasyndrome virus，SFTSV)属于布尼亚病毒科白蛉病毒属，作为一种新发的病毒，人们对其感染过程以及引起的机体免疫反应了解较少，SFTSV感染后，患者主要表现为发热、乏力、恶心、呕吐等胃肠道症状。在少数情况下，会引起意识障碍、皮肤瘀斑、消化道出血、肺出血等严重症状，并造成休克、呼吸衰竭、弥漫性血管内凝血(DIC)等多功能脏器衰竭，最终导致死亡。目前，还没有用于临床治疗的药物，所以本研究的目的主要是为了制备人源抗发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒-Gn蛋白的基因工程抗体，一方面可以用于病毒感染的临床检测，另外一方面也可以用于抗体药物的制备。　　本研究利用噬菌体表面展示技术筛选出具有特异性以及高亲和性的单克隆抗体，该技术在目前科学研究，疾病诊断以及临床抗体药物的制备中都有成功的先例。所谓的噬菌体抗体库技术就是将Fab或者scFv抗体基因与噬菌体外壳蛋白结构基因相互耦联，使抗体蛋白融合表达在噬菌体外壳蛋白的N端，抗体蛋白能够自发的折叠而呈天然蛋白状态，并且能够保持相对独立的空间结构和生物活性，有利于被靶分子识别以及与靶分子结合，通过“吸附-洗脱-扩增”三轮富集过程，可以从噬菌体抗体库中筛选出特异性针对抗原的单克隆抗体，并且通过各种试验对表达的抗体进行功能鉴定。　　本研究主要分两大部分:　　第一部分:我们分别采用SFTSV-AH12全病毒颗粒和重组表达SFTSV-Gn蛋白对人源抗SFTSV Fab噬菌体抗体库进行富集筛选，分别经过三轮的“吸附-洗脱-富集”过程，随机各挑选了400个克隆，通过ELISA对Fab抗体的结合特异性进行检测。结果显示通过病毒颗粒筛选，我们获得了364株特异性针对SFTSV核蛋白的阳性克隆，并没有获得特异性针对Gn蛋白的阳性克隆;经过包被SFTSV-Gn重组蛋白筛选，我们获得55株与Gn蛋白特异性结合的阳性克隆，经序列分析，总共获得8株唯一序列的阳性克隆，其中5株来自Lambda库，3株来自Kappa库。　　第二部分:将8株Fab抗体可变区基因克隆入单质粒/哺乳动物细胞表达载体HL51-14上，通过PEI转染试剂瞬时转染293T细胞，收集细胞上清获取分泌表达的IgG全抗体，并使用Protein-A亲和层析柱纯化IgG抗体，分别采用ELISA、IFA和Western-blotting方法对IgG全抗体进行功能鉴定，并通过微量中和试验检测IgG抗体的中和活性。结果表明经ELISA、IFA和Western-blotting检测证实这8株IgG抗体均能特异性结合Gn蛋白，且针对的是线性表位，微量中和试验显示8株新筛抗体没有表现出中和活性。通过竞争ELISA试验显示8株IgG抗体与mAb-1C8作用于不同的抗原表位，mAb-1C8已经证实具有中和活性，且结合的抗原表位是构象表位。　　综上所述，通过病毒颗粒筛选出大量针对NP的Fab抗体，并没有筛选得到特异性针对Gn蛋白抗体，表明NP具有强的免疫原性，在SFTSV感染机体免疫中发挥重要作用;通过Gn蛋白筛选得到了抗Gn蛋白抗体，虽然所筛选的抗体没有中和活性，但可以用于病毒的检测以及为后续SFTSV人源单克隆抗体的研究提供参考和借鉴。

关键词： Xenotransplantation   cartilage   complement   antibody   complement regulatory proteins   cytokine release   anaphylatoxin   CELL-MEDIATED CYTOTOXICITY   TRANSGENIC PIGS   RHEUMATOID-ARTHRITIS   PORCINE CHONDROCYTES   XENOGRAFT REJECTION   CYNOMOLGUS MONKEY   CARTILAGE DEFECTS   H-TRANSFERASE   EXPRESSION   TRANSPLANTATION  

摘要： Advances in animal transgenesis may allow using xenogeneic chondrocytes in tissue-engineering applications for clinical cartilage repair. Porcine cartilage is rejected by humoral and cellular mechanisms that could be overcome by identifying key molecules triggering rejection and developing effective genetic-engineering strategies. Accordingly, high expression of alpha 1,2-fucosyltransferase (HT) in xenogeneic cartilage protects from galactose alpha 1,3-galactose (Gal)-mediated antibody responses. Now, we studied whether expression of a complement inhibitor provides further protection. First, porcine articular chondrocytes (PAC) were isolated from non-transgenic, single and double transgenic pigs expressing HT and moderate levels of human CD59 (hCD59) and their response to human serum was assessed. High recombinant expression of human complement regulatory molecules hCD59 and hDAF was also attained by retroviral transduction of PAC for further analyses. Complement activation on PAC after exposure to 20 % human serum for 24 hours mainly triggered the release of pro-inflammatory cytokines IL-6 and IL-8. Transgenic expression of HT and hCD59 did not suffice to fully counteract this effect. Nevertheless, the combination of blocking anti-Gal antibodies (or C5a) and high hCD59 levels conferred very high protection. On the contrary, high hDAF expression attained the most dramatic reduction in IL-6/IL-8 secretion by a single strategy, but the additional inhibition of anti-Gal antibodies or C5a did not provide further improvement. Notably, we demonstrate that both hCD59 and hDAF inhibit anaphylatoxin release in this setting. In conclusion, our study identifies genetic-engineering approaches to prevent humoral rejection of xenogeneic chondrocytes for use in cartilage repair.

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征   新型基因工程疫苗   研究进展  

摘要： 猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种对养猪业危害极为严重的疾病,PRRS疫苗的研制对于PRRS的防治工作有重要的意义.文章介绍了PRRS基因工程亚单位疫苗、核酸疫苗及活载体疫苗的研究进展.