关键词： 畜牧业总产值   口蹄疫   牲畜五号病   病毒病   基因工程疫苗   出口禁令   法国   法兰西共和国  

关键词： 基因工程抗体   中国医学科学院肿瘤研究所肿瘤医院   VEGF  

关键词： 新书   功能   免疫球蛋白重链   基因工程抗体   中国生物工程学会   恒定区   生物技术  

关键词： 血小板   膜糖蛋白Ⅲa   噬菌体展示   单链抗体(ScFv)   嵌合 Fab   原核表达   体外特性  

摘要： 血小板血栓形成是血管闭塞性疾病的主要成因。其表面的糖蛋 白Ⅱb/Ⅲa是血小板聚集最终共同途径的关键要素。阻断GPⅡb/Ⅲa 与纤维蛋白原的结合，能高效地抑制血小板的聚集，进而使血小板血 栓不能形成。SZ-21是我室制备的一株针对GPⅢa的单克隆抗体，经 家兔颈动—静脉血栓模型证实能显著降低血栓形成，显示了在抗血栓 治疗中的潜在价值。为降低鼠源性单抗免疫原性(HAMA)及全抗体Fc 段对血小板的破坏，本研究将SZ-21制备成小分子抗体，并对这一抗 体片段进行了纯化、复性和体外性质的研究。 一 SZ-21单克隆抗体可变区基因的克隆和序列分析 采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术，从分泌抗血小板膜 糖蛋白Ⅲa单克隆抗体SZ-21杂交瘤细胞中克隆了该抗体的重、轻链 可变区(V区)基因，并测序分析。SZ-21重链(V)基因全长为342 bp， 轻链(V)基因全长为306 bp，分别编码114和102个氨基酸。基因序 列登录号为VH：AF354053，VL：AF354054。 二 SZ-21单链抗体(SZ-21ScFv)基因的筛选和表达 为最大限度地保留单链抗体的血小板结合活性，利用噬菌体展示 技术进行了高亲和力筛选。将SZ-21 V和V基因分别与含有 (GlySer)多肽接头的载体pSW1-ScFv连接，构建成单链抗体基因 pSW1-SZ21ScFv，克隆到噬菌体分泌型表达载体pHEN1中。同时亲 和层析纯化血小板膜糖蛋白Ⅲa，用糖蛋白Ⅲa作为抗原进行高亲和力 筛选。经过四轮“吸附—洗脱—扩增”的富集过程，phage-ELISA 得到一个具有与血小板高亲和力的克隆，转化*** HB2151，表达 了可溶性ScFv融合蛋白。ELISA和Western blot证实该融合蛋白保 留了亲本抗体的血小板结合特性。 三 SZ-21单链抗体高效表达载体的构建及其在大肠杆菌中的融合表达 将上述筛选得到的单链抗体基因亚克隆到大肠杆菌融合型表达载 体pET20b中，得到pET20b-21ScFv。通过IPTG诱导在大肠杆菌E coli 抗血小板膜糖蛋白基因工程抗体的制备和性质研究 摘 要 BLZI(DE3)PlysS中表达了功能分子。SDS－PAGE和 Western blot显 示表达产物的分子量为27000。该融合蛋白除少量为分泌型表达外， 主要以包涵体形式存在，表达量占菌体总蛋白的 21％，约 20 m叭。同 时探索了该抗体片段的最佳复性条件。把包涵体形式表达的 SZ上 单 链抗体片段用尿素溶解，经过蛋白质的体外重折叠复性过程，成功地 得到具有活性的单链抗体片段。ELISA和Western印迹检测证实，该 鱼链抗体保留了与血小板特异结合的能力。 四SZ毛 的纯化和体外性质研究 通过NINTA树脂亲和吸附纯化，获得具有活性的高纯度单链抗 体片段，纯度达95％以上。流式细胞仪检测证实该单链抗体能与人脐 静脉内皮细胞和血小板反应。体外实验表明，SZ2 单链抗体能够抑 制 ADP诱导的血小板聚集，其抑制能力呈剂量依赖性，其 IC刃为 12 ug／mL，在浓度为20 ug／mL时达到最大抑制率。对花生四稀酸诱导的 血小板聚集亦有相似的抑制作用。此外，SZ上 单链抗体同样能够抑 制纤维蛋白原与血小板的结合，显示了其抗血栓作用。 以上结果表明，制备的基因工程抗体具有原鼠单克隆抗体的抗 血栓形成能力，减少了全抗体的人抗鼠抗体反应(HAMAh 同时该小 分子抗体片段去除了抗体的FC段，避免鼠源性单克隆抗体引起血小 板严重下降的副作用。该单链抗体有望用于抗血栓治疗。 五抗血小板膜糟蛋白单抗SZ毛 嵌合Fab片段基因构建和表达研究 利用基因克隆技术，从杂交瘤细胞系 SZ上 中克隆出轻、重链可 变区基因，然后亚克隆到含有人恒区基因C＊和C。的质粒pSWIFab 中，构建成人一鼠嵌合Fab抗体片段质粒pSZ2，在大肠杆菌中表 达了可溶性＊b抗体片段。SDS－PAGE显示在分子量(Mr)45 000处 有一诱导条带，与该嵌合抗体的理论计算值相符。表达量约为 800 fig／L， ELISA和Western检测证实表达产物具有与血小板结合的活性。

关键词： 单克隆抗体   免疫应答   人CD154单克隆抗体   基因工程   人CD154   基因克隆   基因表达   单克隆抗体   免疫应答   基因免疫   单链抗体  

摘要： 该课题的研究内容包括以下四个部分:第一部分:人CD154基因克隆、在大肠杆菌中的表达和单克隆抗体的制备;第二部分:人CD154基因真核表达载体的构建、表达和基因免疫制备抗人CD154单克隆抗体.第三部分:抗人CD154单克隆抗体抑制免疫应答的实验研究;第四部分:抗人CD154基因工程单链抗体的构建.小结;该文研究在国内首次克隆到人CD154基因,并在大肠杆菌得到表达,采用人GST-hCD154融合蛋白作免疫原制备抗人CD154单克隆抗体.为真核表达产物的鉴定奠定了基础.该文研究成功构建含有人CD154基因的真核表达质粒并在CHO细胞得到表达;在国内外首次采用DNA免疫研制了CD154单克隆抗体,可以有效避开大量分离纯化抗原,并且所得到的抗体可以针对天然抗原,为抗人CD154抗体的功能研究提供了物质基础.用该研究研制的抗人CD154单克隆抗体,进行抑制免疫应答作用的实验研究,结果显示:在体外实验中,此抗体可以抑制淋巴细胞增殖;在SCID鼠体内重建人的免疫功能后进行研究,结果显示,抗人CD154单克隆抗体可以抑制人IgG的产生,提示所研制的抗人CD154单克隆抗体能够抑制免疫反应,为应用于临床打下了基础.该研究在国内外首次构建人CD154基因工程单抗体,使抗人CD154单抗应用于人体内治疗成为可能,为特异性抑制免疫反应的临床应用奠定了基础.

关键词： 口蹄疫病毒   鼻病毒   基因工程疫苗   科研人员  

关键词： 传染性喉气管炎   鸡痘病毒   重组病毒   基因工程疫苗   鸡痘   痘病   二价  

关键词： 单链抗体   基因工程   双特异抗体   Diabody   Minibody  

摘要： 双特异抗体可以结合两种不同的抗原,具有特殊性能,在临床诊断和治疗中具有广阔的应用前景,目前为国际上研究热点之一.该研究利用单链抗体(ScFv)构建两种基因工程双特异小分子抗体模型,为双特异小分子抗体的开发和研究提供基础.

关键词： 进口大豆   日本   鸡蛋价格   鸡肉   禽肉   玉米价格   猪肉市场   大豆进口   农产品出口补贴   土鸡   赖氨酸盐酸盐   西部地区   综合信息   本地黄牛   基因工程疫苗   反倾销立案调查   草食牲畜   饲料级   农业部  

关键词： 钩端螺旋体   基因片段   筛选鉴定   subtractive hybridization   相似性分析   基因组差异   抑制消减杂交技术   阳性克隆   内切酶   基因工程疫苗   毒力相关基因   相似性匹配   资源开发   致病基因   遗传研究   序列测定   消减文库   外膜蛋白   特殊设计   收录  

摘要： 目的:利用抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization, SSH),比较致病与非致病钩体之间基因组差异,筛选致病钩体特有的基因片段,以分析钩体毒力相关基因.方法:以赖型钩体017株为tester,非致病性patoc Ⅰ株为driver进行SSH.用3种四碱基内切酶RsaⅠ、HaeⅢ、AluⅠ分别酶切基因组DNA,选择最适内切酶消化产物(小于2 kb的片段),连接特殊设计的Adaptor进行消减杂交的PCR,得到消减混合物,与T/A克隆载体连接,转化JM109建立差异消减文库,经PCR和Southern blotting筛选鉴定阳性克隆,进而对部分片段进行测序和相似性分析.结果:AluⅠ适于将钩体酶切成用于SSH技术的小片段;经PCR和Southern blotting筛选鉴定得到25个致病钩体中特异存在的阳性克隆,阳性率达到62.5%;序列测定显示插入片段大小为149-1 506 bp,平均480 bp, GC含量从26.30%到51.98%不等,平均36.63%;相似性分析其中6个片段无任何相似性匹配,18个有一定相似性的序列可分为两类:与外膜蛋白或假想蛋白相关和与生化代谢修饰的酶相关.20个序列已被GeneBank收录,收录号分别为AF300873-AF300877,AF325807-AF325821.结论:SSH是一种有效、灵敏的、高特异的比较分析基因组差异的方法,对钩端螺旋体致病基因的筛选、基因组分化、分子遗传研究等具有重要意义;利用SSH技术筛选得到的致病钩体特有消减片段很可能与致病钩体的分子进化和毒力有关,也为我国特有微生物的基因资源开发和基因工程疫苗的设计提供给了重要信息.