关键词:
番鸭细小病毒
鹅细小病毒
VP2基因
基因克隆
序列测定
毕赤酵母
基因工程疫苗
摘要:
用常规病毒学鉴定方法对番鸭细小病毒(MDPV-Q)株的部分理化特性和生物学特性进行了研究,结果表明MDPV颗粒呈圆形形,直径大小为22-24nm,无囊膜,对乙醚、胰蛋白酶、酸有抵抗力,不凝集动物红细胞.番鸭细小病毒有三个结构蛋白,其中VP2结构蛋白具有免疫原性,是病毒刺激机体产生保护性抗体的重要抗原蛋白.通过DNA重组技术,将克隆到的MDPV-Q和MDPV-26的VP2基因片段,经两种限制性SacⅡ和KpnⅠ的酶切,将酶切产物再克隆天表达载体pPICZ<,α>A中,得到表达重组质粒pPICZ<,α>A-M-Q VP2和pPIXCZ<,α>A-M=26 VP2<,α>将这两种表达重组质粒分别转化到毕赤酵母(Pichia pastoris X-33)中进行表达,经甲醇诱导和SDS-PAGE分析结果表明.MDPV-Q VP2和MDPV-26 VP2基因片段的表达产物大小约为73KD,与理论预计相符.此外,该研究还意外地发现,重组质粒转化到酵母菌进行表达,在表达毁结构蛋白的同时,还表达了大小约为58KD和VP3结构蛋白.将表达产物分别接种2日龄无母源抗体的雏番鸭进行免疫保护实验,结果表明该基因工程疫苗具有一定的保护率,但与传统减毒疫苗相比仍有一定的差距.