关键词： vWF因子   基因芯片   脑梗死   心肌梗死   单克隆抗体   双特异抗体   单链抗体   Fab片段   血小板  

摘要： 血栓性疾病的发生是由多种遗传和环境因素共同作用的结果。vWF是由血管内皮细胞和巨核细胞合成的多聚体糖蛋白，既可在高切状态下启动血小板粘附、聚集，又是携带凝血因子Ⅷ的载体，最近的许多体外实验证据显示，vWF在血栓形成中起着关键性作用。研究表明，vWF是一般人群中经常发生的心肌梗死的危险因素，vWF基因启动子区域的-1051G／A、-1792C／G等多态性可通过调节血浆vWF水平而与缺血性心脏病的发生密切相关，vWF多肽序列中Thr789Ala多态性也是Ⅰ型糖尿病病人中冠心病发生的一个危险因素。因而有理由将其作为血栓形成的候选因子进行研究。基因芯片技术已在基因测序，基因突变及多态性分析，基因表达及功能分析，文库筛查，新药开发以及病原体检测等方面进行了应用和探讨，呈现出广阔的应用前景。单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)是遗传变异中最常见的一种变异方式，在人类基因组中其发生频率为每1000bp中0.5-10个。由于多基因与环境间具有十分复杂的相互作用，必须对人群中大量出现的SNP进行确定，才能对它们在疾病发生发展中的作用进行解释。本研究拟探讨vWF基因RsaⅠ、SmaⅠ多态性与血栓性疾病的发生有无相关关系;并对基因芯片技术在SNP检测上的应用进行探讨。 研究中，我们首先建立vWF基因RsaⅠ、SmaⅠ多态性寡核苷酸阵列检测方法。设计、合成两组寡核苷酸探针，使用3甲氧基氨基丙基硅烷、戊二醛等化学物质，实现探针与固相支持物玻片的连接。应用不对称PCR方法扩增RsaⅠ、SmaⅠ多态性片段，在扩增体系中掺入荧光标记dUTP，获得被测片段的单链标记产物。对核酸杂交反应的温度、动力学和离子浓度变化进行研究，获得最佳的杂交鉴别条件，随机抽取20名正常人，酶切法确定多态性基因型，再用寡核苷酸阵列法检测，以验证该方法的准确性。使用该方法对50例血栓病人进行检测，探讨血栓性疾病的发生与vWF基因RsaⅠ、SmaⅠ多态性的关系。结果表明，寡核苷酸阵列法和酶切法对20例标本检测的符合率为100％;血栓病人与正常人之间两位 苏州大学傅士学位论文 中文摘要 点多态性的基因型和等位基因频率的差异均无显著意义（P＞0．05）。因而本研究 成功建立 vWF基因 Rsa、Sma多态性寡核苦酸阵列检测方法，为基因芯片技 术在SNP检测上的应用提供依据;同时也对遗传性疾病的高效诊断途径进行了成 功探索;未获明确证据表明Rsa、Sma多态性与血栓的发生有关。 上述研究中，虽然50例血栓病人与正常人之间Sma多态性在基因频率与 基因型分布的差异上无显著统计学意义，然而 Sma阳性纯合子在血栓病人中的 出现频率为正常人的2．7倍。为弄清这一多态性对血栓发生的确切影响，我们扩 大样本例数，并使用价格低廉的聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析 （PCR－RFLP）技术代替寡核苦酸阵列检测方法，对107例急性脑梗死（脑梗）、 49例急性心肌梗死（心梗）病人和 113例正常对照，检测 vWF基因 Sma多态 性，并对其中来自同一医院的53例脑梗、22例心梗病人和47例正常对照进行 血浆 vWFkg测定。结果，vAF基因 Sma多态位点各基因型和等位基因分布， 在脑梗病人与正常对照组间差异有显著意义①．OD户***;O．05＞户0．02人其 中 S。al阳性纯合子（CC）使患脑梗的危险度提高了 3．29倍（0R＝＝3．29 95％CI： ，1．5个7．01，0．m坝0．001人心梗病人与正常对照组间各基因型和等位基因分布 差异无显著意义（0．50＞p）0．30;0．30＞p＞0．20）。血浆 vWFhg测定结果为，正常 人及脑梗、心梗病人血浆 VWFkg水平分别为 0．468、0．584和 0．783U砌l。脑梗 病人与正常对照间无显著性差异（peo．195人而心梗病人与正常对照间有显著性 差异（p＝0．00人 v呷基因 Sma多态位点各基因型分布在脑梗、心梗病人和正 常人各组中与血浆VWF Ag水平均无相互关系（P＝0．323，P＝0．315，pe

关键词： 单克隆抗体   出版   基因工程抗体   细胞与分子免疫学杂志  

关键词： TOLERANT SOYBEAN LINE   RAPE BRASSICA-NAPUS   TRANSGENIC PLANTS   OILSEED RAPE   PHENOTYPIC PLASTICITY   WILD RELATIVES   BETA-CAROTENE   UNITED-STATES   RECENT ORIGIN   ORYZA-SATIVA  

摘要： Several claims have been made about genetic engineering (GE) in comparison with crop domestication and classical plant breeding, including the similarity of genetic changes between those taking place during domestication and by GE, the increased speed and accuracy of GE over classical plant breeding, and the higher level of knowledge about the actual genes being transferred by GE compared with classical breeding. In reviewing evidence pertaining to these claims, I suggest that (i) it is unlikely that changes introduced by GE will make crops weedier, although exceptions have been noted, (ii) changes brought about by GE currently often involve gain-of-function mutations, whereas changes selected during domestication generally involve loss-of-function mutations, (iii) adoption of GE cultivars has been much faster than any previous introduction and spread of agriculture that occurred earlier but has occurred at about the same rate as the spread of cultivars obtained by plant breeding, (iv) introduction of agriculture reduced the health of agriculturists compared with that of hunter-gatherers, suggesting that introduction of innovations do not automatically improve well being, (v) although GE is not a substitute for plant breeding, it can significantly contribute to plant breeding by generating additional genetic diversity, (vi) uncertainties associated with the site of insertion of transgenes in the genome and the expression of transgenes following insertion, makes GE less rapid and precise than originally claimed, and (vii) a potential advantage of GE over classical breeding is the knowledge of the actual gene(s) being inserted, although few cases of unwanted gene introductions through classical plant breeding have been documented. Further advances in GE will increase the precision of the technique, its relevance to consumers, and its environmental friendliness. What is most needed are evenhanded, case-by-case assessments of the benefits and potential pitfalls of GE in

关键词： 乙型肝炎疫苗   HBS   HBsAg   基因工程疫苗   天然抗原   研究进展  

摘要： 曾在国内外广泛用于乙型肝炎预防的血源性乙型肝炎疫苗（PDV）因血源供应有限及具有潜在危险性,已逐步被基因工程疫苗所取代。近年来,一些新型治疗性疫苗也相继用于慢性乙型肝炎的治疗研究。本文将对预防性及治疗性乙型肝炎疫苗的研究进展作一综述。

关键词： 基因工程疫苗   军事医学科学院   霍乱   二号病  

关键词： 基因工程疫苗   牛肉   消费   肉类   生产关系   病毒病   口蹄疫   牲畜五号病   疯牛病   食用家畜  

关键词： 母山羊   獭兔   波尔山羊   布尔山羊   普里昂   肉羊品种   基因工程疫苗   种羊   羊肉   肉类   网刊   克雅氏症   克隆羊   本地羊   口蹄疫   牲畜五号病   病毒病   胚胎细胞   新品系   文摘   检索工具  

关键词： 口蹄疫   经过   牲畜五号病   病毒病   基因工程疫苗   家畜   农畜  

摘要： 复旦大学生命科学院和上海农科院等单位的科研人员经过10多年的协作攻关。在口蹄疫基因工程研究领域获得重大突破。经专家鉴定,他们研制成功的“抗猪O型口蹄疫基因工程疫苗”属国内首创。 口蹄疫是当今世界上最为严重的家畜传染病,危害牛、猪、羊等偶蹄类

关键词： 转基因杨树   应用前景   育种研究   基因工程育种   杂交子代   树木   基因树   华盛顿大学   杂交育种   杨属植物   实验材料   木本植物   离体实验   经济价值   转移   兴趣   培养   焦点   分布   白杨  

摘要： 1986年，华盛顿大学Gordon M教授首次成功得到转基因的木本植物——杂交的白杨(Populus trichocarpa与***杂交子代)，这引起了人们对转基因树研究的极大兴趣，也使人们对树木育种研究的认识有了重大的改变，即从传统的杂交育种转移到利用基因工程育种，基因工程逐渐成为树木育种研究的焦点。杨属植物通常作为转基因树木研究的实验材料，这主要是因为它具有以下优点：(1)分布广泛，并且有较高经济价值；(2)很容易进行离体实验和培养，……

关键词： 乙型肝炎病毒   表位   PreS1   基因工程抗体   单链抗体   噬菌体展示  

摘要： 乙型肝炎病毒（HBV）感染是公认的防治难题。抗体性药物是乙型肝炎治疗领域的新方向之一。随着噬菌体展示技术的发展，抗体库的构建方案日趋成熟。全人源化乙型肝炎病毒基因工程抗体逐渐成为这一领域的研究热点。 抗体在保护性免疫过程中起着决定性作用。针对具体抗原表位的抗体才能满足预防感染或治疗的需要。乙型肝炎表面抗原（HBSAg）颗粒表面的PreS1抗原，是与HBV的侵袭密切相关的抗原表位。人源化高亲和力的Pres1抗体，将在抗体药物治疗HBV感染这一领域发挥作用。 本研究以抗体多样性的遗传机制为理论基础，借助噬菌体展示技术，以应用于临床治疗为目标，直接介入抗体工程的最前沿，全人源化基因工程抗体中的单链抗体。结合保护性免疫的最新进展，针对乙型肝炎病毒表位Pres1，为获得抗体性药物作了前期研究工作。 本研究以健康供血者的外周血淋巴细胞为来源，部分以偶联BSA的PreS1肽体外免疫后，分别提取总RNA，扩增抗体轻链和重链可变区基因，组装成单链抗体（scFv）基因。借助噬菌体展示技术，平行构建了天然及免疫人源单链抗体库。再以PreS1肽进行固相淘选，两个抗体库均获得了PreS1单链抗体。 本研究首次获得了两个乙型肝炎病毒表位Pres1单链抗体ZG1、ZG2的基因。同时对比了两个抗体库淘选结果：免疫库的多克隆ELISA、单克隆ELISA结果均优于天然库;每轮淘选的结果表明免 大连理工大学博士学位论文 疫库次级库的容量超过天然库4－50倍。所以，在体外免疫阶段淋巴 细胞的抗体基因趋向抗原进行了重排，目的抗体基因丰度得到提高。 竞争ELISA 也证实，来自免疫库的单链抗体ZGI 亲和力为 10’乙 10－‘M，高于来自天然库的 ZGZ，亲和力 10‘7一”’M。说明体外 免疫是成功的。这一结果表明取材于体外免疫的淋巴细胞构建免疫 抗体库是获得高亲和力抗体的捷径。 为了优化抗体基因的多样性，本研究完善了抗体库的构建方法。 在单链抗体组装过程中，我们首次采用了通过不对称PCR扩增单链 DNA，再俩俩连接的方法。结果表明，这种方法的效率高于传统的 组装方法。 总之，本研究首次获得了高亲和力的 PreS 人源单链抗体及其 基因，为乙型肝炎的人源化抗体治疗做了前期研究。该单键抗体基 因已经申请了国家发明专利，发明名称：抗乙型肝炎病毒 PreS 抗 原的人源单链抗体。申请号为 01 127973．7。