关键词： 多目标优化   核心专利挖掘   超体积函数   基因工程疫苗  

摘要： 专利是技术信息最有效的载体,挖掘核心专利可以为组织机构以及个体的创新实践活动提供更加高效的背景技术支撑,对把握某领域技术发展水平,推动技术进步具有重要意义。本文对当前核心专利识别的研究现状进行调研分析,并在前人研究的基础上提出基于多目标优化方法的核心专利挖掘模式,选取基因工程疫苗领域的专利数据进行了实证分析。本文筛选了9项专利指标作为对象并归类到专利技术价值、经济价值、法律价值三个目标下,基于此运用超体积函数进行测度,最终识别出200项核心专利,为全面了解该领域的技术发展现状以及当前的核心专利识别研究提供方法借鉴。

关键词： 发酵工程   基因工程育种   土壤微生物学   研究与开发   微生物育种   细胞工程   微生物生态学   微生物菌种  

摘要： 该实验室1991年12月组建,从事发酵工程、酶工程、细胞工程、基因工程、食用菌、农业微生物育种和免疫领域的研究与开发,主要研究学科有微生物、植物的基因工程育种、微生物菌种资源学、微生物的基因工程育种、发酵工程、生物防治、微生物肥料学、土壤微生物学、微生物生态学免疫微生物和保健功能食品等。

关键词： 花青素苷   转基因   分子育种  

摘要： 蓝色花观赏价值高,花色成因复杂。目前,在蓝色花色形成机理和基因工程育种研究方面取得了大量的研究进展。综述了蓝色花形成的化学、生理学和分子生物学机理,利用基因工程技术培育蓝色花的育种实践:包括转入花青素苷合成途径上的关键酶基因,抑制内源竞争酶基因,转入液泡pH值调节基因和金属离子转运蛋白基因等。在此基础上总结出几种蓝色花基因工程育种的基本策略,以期为蓝色花基因工程育种提供参考。

关键词： 基因工程   疫苗   动物疫病   疾病防治   应用设施  

摘要： 随着我国环境污染问题日益严重,动物在生存过程中面临的疾病威胁日益增多。为有效预防动物疫病,人们为动物的生存提供了健康环境。研究人员利用现代先进的生物学方法提高了疫苗的稳定性和安全性。

关键词： 非洲猪瘟病毒(ASFV)   细胞凋亡   自噬   免疫应答   基因工程疫苗  

摘要： 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起家猪的一种急性、出血性、高度接触性蜱传病毒病,可致家猪网状内皮系统出血及高死亡率,是危害世界养猪业健康发展最严重的传染病之一。ASFV是一种大型的DNA病毒,结构复杂,其基因组编码大量蛋白。该论文介绍了ASFV的特性,免疫应答机制如免疫逃逸、体液免疫和细胞免疫,以及基因工程疫苗如减毒活疫苗、亚单位疫苗、病毒载体活疫苗及DNA疫苗研究的最新进展,并对中国ASF的疫苗研制、防控进行了展望。

关键词： 犬细小病毒(CPV)   基因工程抗体   共转染   HEK-293F细胞  

摘要： 本研究旨在利用HEK-293细胞系制备鼠源犬细小病毒(canine parovirus,CPV)基因工程抗体并检测其生物活性。通过抗体亚型检测试剂盒检测CPV单克隆抗体亚型;采用间接ELISA检测CPV单克隆抗体的亲和力和特异性;经RACE-PCR获得CPV单克隆抗体的可变区序列,将可变区序列与鼠源抗体恒定区序列连接;分别构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-L和pcDNA3.1(+)-H,将载体共转染HEK-293细胞,采用血凝抑制与中和试验的方法检测鼠源CPV基因工程抗体生物活性;采用HEK-293F细胞悬浮表达并用间接ELISA方法检测鼠源CPV基因工程抗体的表达量;用Protein A亲和层析柱纯化鼠源CPV基因工程抗体后进行SDS-PAGE鉴定;间接免疫荧光检测纯化后鼠源CPV基因工程抗体的活性。结果显示,CPV单克隆抗体亚型为IgG 2b,亲和力常数6个Ka平均值为1.02×10^11 L/mol,只与CPV VLPs发生反应。琼脂糖凝胶电泳结果显示,试验成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-L和pcDNA3.1(+)-H;HEK-293和HEK-293F细胞培养上清液血抑效价分别为1∶2^4和1∶2^6,中和试验结果显示,HEK-293和HEK-293F细胞培养上清液中和效价分别为1∶152和1∶1 290;鼠源CPV基因工程抗体在HEK-293F细胞中的表达量为5.97 mg/L,SDS-PAGE分析在55和25 ku处出现条带,表明鼠源CPV基因工程抗体成功在HEK-293F细胞中表达并纯化。间接免疫荧光检测结果表明,纯化后鼠源CPV基因工程抗体具有良好的生物活性。本研究在HEK-293F细胞中成功表达具有中和活性、纯度较高的鼠源CPV基因工程抗体,为今后CPV基因工程抗体药物的研发奠定基础。

关键词： 纳他霉素   自然分离   诱变选育   原生质体育种   基因工程育种  

摘要： 纳他霉素生产中菌种选育的方法主要有自然分离、诱变育种、原生质体育种、基因工程育种等。在生产单位中运用最多的诱变育种。

关键词： 人源化抗体   小分子抗体   抗体融合蛋白  

摘要： 随着基因工程技术的发展和对抗体基因结构的深入研究,开发了第三代抗体—基因工程抗体,被广泛用于疾病的临床诊断、治疗和预防等领域。主要介绍基因工程抗体药物的研究进展。

关键词： 狂犬病病毒   G蛋白   口服疫苗   减毒沙门氏菌  

摘要： 中国的狂犬病主要由农村家犬通过咬伤传染所致,为了研制高效实用的家犬用狂犬病口服基因工程疫苗,本研究把狂犬病病毒G蛋白基因插入真核表达质粒pIRESneo,构建重组表达质粒pIRESneo-G,转化入鼠伤寒减毒沙门氏菌SL3261,构建重组口服疫苗SL3261-pIRESneo-G。通过口服免疫小鼠,检测免疫血清中和抗体水平及其病毒保护效果。结果显示,经小鼠口服免疫接种一次后第三周能产生高水平的中和抗体水平,达到WHO要求的0.5IU/mL;免疫小鼠经肌肉注射100LD50/0.03mL的野毒株GX074后获56%保护效果。

关键词： 猪流行性腹泻病毒   S1蛋白   昆虫杆状病毒表达系统   免疫原性   基因工程疫苗  

摘要： [目的]在昆虫细胞中表达猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV) S1 NTD蛋白,研究其免疫原性,为基于PEDV S蛋白的基因工程亚单位疫苗的研究奠定基础.[方法]PCR扩增PEDV S1-NTD基因,构建其重组表达质粒pFastBac Dual PEDV S1-NTD和重组穿梭质粒Ac-PEDV S1-NTD.将Ac-PEDV S1-NTD转染sf9昆虫细胞,利用昆虫杆状病毒表达系统制备重组杆状病毒rvAcPEDV S1-NTD.将P2代重组杆状病毒感染sf9细胞,Western blot鉴定重组蛋白的表达,空斑试验测定重组杆状病毒的滴度.在此基础上,分别以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.1,1和3的P2代重组杆状病毒感染sf9细胞,并在感染后1,2,3,4和5d收集细胞,通过Western blot和空斑试验分别检测目的蛋白的表达量和重组杆状病毒的增殖情况.将MOI为0.1的P3代重组杆状病毒皮下注射免疫BALB/c小鼠,每隔2周免疫1次,共免疫3次,以注射PBS、空载体Bacmid和PEDV商业疫苗为对照组,于首免后不同时间采集血液分离其血清,ELISA法检测血清中PEDV特异性抗体的水平;于首免后35 d剖取小鼠脾脏,分离其淋巴细胞;PEDV刺激后,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞的增殖情况.[结果]PCR扩增获得了约738 bp的PEDV S1-NTD基因;成功构建了重组表达质粒pFastBac Dual PEDV S1-NTD、重组穿梭质粒Ac-PEDV S1-NTD和重组杆状病毒rvAcPEDV S1-NTD.利用杆状病毒表达系统在sf9细胞内成功表达了重组PEDVS1-NTD蛋白,且杆状病毒以MOI为1感染sf 9细胞后在第3天蛋白表达量达到最高.在首免后35 d,重组杆状病毒免疫组小鼠血清效价达到最高值,为1∶5 000,与商业疫苗组效价一致;淋巴细胞增殖试验表明,重组杆状病毒rvAcPEDV S1-NTD免疫组小鼠脾淋巴细胞对PEDV的刺激也发生了显著增殖(P<0.05),而PBS和空载体Bacmid对照组淋巴细胞未发生明显增殖(P>0.05).[结论]成功构建了重组杆状病毒rvAcPEDV S1-NTD,在昆虫细胞中成功表达了PEDV S1-NTD蛋白,且具有较好的免疫原性.