关键词： 平菇育种技术   杂交育种   诱变育种   原生质体融合育种   基因工程育种  

摘要： 通过查阅相关文献,概述选择育种、杂交育种、诱变育种、原生质体融合育种、基因工程育种等5种育种技术在平菇上的应用研究现状和存在的优缺点。

关键词： 基因工程抗体   小分子   抗体库技术   体外展示技术   检测  

摘要： 对基因工程抗体的种类以及筛选制备进行详细介绍,并对目前其在小分子识别中的研究进行梳理总结,分析基因工程抗体在识别小分子方面的优势,对应用中存在的问题进行讨论,希望对基因工程抗体在小分子识别中的进一步应用和产品研发提供一些思路。

关键词： 新城疫   新城疫疫苗   基因工程疫苗  

摘要： 新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的禽类的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告的动物疫病,我国农业农村部将其列为一类动物传染病,是世界上流行范围最广、对全球养禽业造成最严重经济损失的家禽传染病之一。目前,疫苗免疫仍是控制此病重要的手段,被广泛应用于禽业生产中。随着生物科学和技术的发展,新城疫疫苗的研制与创新也在不断进步。本文将从新城疫疫苗研究现状和主要新城疫疫苗及其优缺点作简要阐述,为新城疫疫苗的研究和合理应用提供参考。

关键词： 猪瘟活疫苗   猪圆环病毒2型基因工程疫苗   猪肺炎支原体灭活疫苗   联合免疫  

摘要： 试验旨在评估猪瘟活疫苗、猪圆环病毒2型基因工程疫苗和猪肺炎支原体灭活疫苗三种疫苗联合免疫的效果。试验选取7日龄健康仔猪500头,分为A组(联合免疫组)和B组(单苗免疫组)。A组在21日龄,每头仔猪免疫1 mL猪圆环病毒2型基因工程疫苗、2 mL猪肺炎支原体灭活疫苗和1头份猪瘟活疫苗,在55日龄每头仔猪免疫1头份猪瘟活疫苗。B组猪按照试验猪场现有的程序免疫。在三种疫苗联合免疫后的第四周、第八周采血,检测血清中猪瘟病毒抗体和猪圆环病毒2型抗体。联合免疫组猪圆环病毒抗体和猪瘟抗体的水平与单苗免疫组相当。结果表明,猪瘟活疫苗、猪圆环病毒2型基因工程疫苗和猪肺炎支原体灭活疫苗三种疫苗,可以联合一起,同时免疫。

关键词： 抗寄生虫药物   重要寄生虫病   基因工程疫苗   人兽共患寄生虫病   卫生研究所   流行病学   科研成果   生化代谢  

摘要： 栉风沐雨砥砺奋进,春华秋实桃李满园。寄生生物学研究团队至今已走过四十余载,四十载的章回,不忘初心,直济沧海;四十载的光阴,砥砺前行,日月齐辉。筚路蓝缕奋力行,一代一代寄生虫人以兼容并蓄的气度和严谨求实的精神一直致力于动物源及人兽共患寄生虫病基础理论和综合防控技术研究,主要开展寄生虫的生化代谢、致病机理、流行病学与综合防控等应用基础研究,研发新型抗寄生虫药物和基因工程疫苗,取得了一系列科研成果和良好的社会效益,为畜禽重要寄生虫病的综合防控提供技术支撑。

关键词： 新城疫病毒   传统疫苗   基因工程疫苗  

摘要： 新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的禽类的一种急性烈性传染病,严重危害养禽业的发展。在疫苗接种免疫压力下,NDV演化出不同的基因型,且各基因型毒株之间不能较好地提供交叉保护,导致临床上多见非典型新城疫与高抗体家禽发生NDV感染。目前,疫苗免疫仍是预防该病的重要措施,随着其病原学与分子生物学技术的发展,研究者研发了不同类型的ND疫苗。论文就新城疫病毒的病原分子特征、传统疫苗及新型基因工程疫苗的研究现状及发展前景进行综述,旨在为我国新城疫的防控及新城疫疫苗的研发提供一定的参考。

关键词： IBRV   常规疫苗   基因工程疫苗   防控  

摘要： 牛传染性鼻气管炎(infectious bovine rhinotracheitis,IBR)是由牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)即牛疱疹病毒1型(BoHV-1)感染所引起的一种高度接触性传染病。该病给我国养牛业带来了巨大的经济损失。由于缺乏有效的治疗性药物,疫苗免疫仍然是防控该病的有效措施。当前,牛传染性鼻气管炎疫苗主要包括灭活疫苗、弱毒疫苗2种常规疫苗和亚单位疫苗、DNA疫苗、IBRV基因缺失疫苗、病毒活载体疫苗4种基因工程疫苗,各种疫苗各有优点。现对上述疫苗的最新研究进展进行综述,以期为IBRV疫苗的研究与开发提供参考。

关键词： 动物疾病防治   基因工程疫苗   生物技术  

摘要： 传染性疾病的危害范围较广、种类较多,严重影响了动物的安全.而且,有些传染性疾病也会通过不同的途径传播到人类身上,进而威胁着人的身体健康.当前,对相当一部分的传染病仍然没有有效的控制手段,在这样的环境下,疾病预防就显得非常重要.基因工程是一门新兴的科学技术,现代生物技术的发展也促使了基因工程疫苗的出现,且随着技术的不断发展,该技术在动物的疾病防治中得到了长足的应用.

关键词： 大田软海绵酸   单克隆抗体   基因工程抗体   纳米颗粒   酶联免疫分析  

摘要： 大田软海绵酸（Okadaic acid,OA）是一种聚醚类海洋生物毒素,具有一定的生物毒性,其产生于环境中的赤潮藻类,通过贝类滤食性行为富集后引起一系列环境污染问题并危害水产品安全,因此开展OA毒素快速灵敏检测是环境分析中重要内容之一。本文通过体内诱导制备抗OA腹水并从中纯化出抗OA单克隆抗体,并以此为基础进行了基因工程的制备和表达探索,并建立不同金纳米颗粒标记抗体的酶联免疫分析ELISA方法,实现了对OA海洋毒素的灵敏分析。主要内容包括如下:第一章,绪论。概述了OA性质及其检测技术进展,阐述了不同抗体的特点及其在海洋毒素中的分析应用,提出了论文选题依据和主要研究内容。第二章,抗OA单克隆抗体制备及其性能表征。基于小鼠体内诱导法制备抗OA单克隆抗体（anti-OA-Mc Ab）;开展anti-OA-Mc Ab性能分析,测定抗体亚型、特异性、亲和力等参数。研究表明,抗体效价达到1:128000,结合活性良好抗体亚型为Ig G1,亲和力常数Kaff为1.4×10～9 L/mol,具有高亲和力、高特异性。第三章,基于基因工程技术探索制备抗OA单链抗体和嵌合Ig G抗体。开展了总RNA提取、c DNA合成和抗体V和V基因扩增,利用SOE-PCR技术组装制备了抗OA单链抗体sc Fv,并构建了p BD-his6-mbp-linker-OA-sc Fv、p SUMO-linker-OA-sc Fv、p Trx-Tig-linker-OA-sc Fv重组融合表达载体以及p ET28a-SP3-H-linker-OA-V、p ET28a-SP3-L-linker-OA-V抗OA嵌合Ig G重组抗体表达载体,进行体外表达后,对抗体蛋白进行了性能表征。研究发现,重组质粒基因测序一致性高,基因工程抗体蛋白溶解性良好,但是存在明显的非特异性吸附。第四章,基于金纳米颗粒标记单克隆抗体的ELISA方法研究及应用。合成了胶体金Au NPs、金纳米花Au NFs、纳米金负载铂复合颗粒Pt@Au NPs,作为抗OA单克隆抗体的载体,构建基于不同金纳米颗粒标记抗体的OA检测ELISA法。结果表明,基于三种金纳米颗粒的ELISA方法检测限分别为0.15 ng/m L、0.076 ng/m L、0.070 ng/m L,比传统ELISA方法灵敏度高5～10倍。以Pt@Au NPs标记抗体对牡蛎、贻贝、花蛤样品进行OA检测分析,在10 ng/m L、5 ng/m L、1 ng/m L浓度下的加标回收率为97.67±2.30%～108.49±8.33%,性能稳定,为ELISA检测OA提供了新的灵敏分析技术。

关键词： 重组腺病毒   禽4型腺病毒   鸡传染性法氏囊病病毒   HAdV-5   基因工程疫苗   AdEasy系统  

摘要： 禽4型腺病毒（Fowladenovirusserotype-4，FAdV-4）和鸡传染性法氏囊病病毒（Infectiousbursaldiseasevirus，IBDV）是困扰养禽业的两大重要禽病原体，这两种病原的流行传播给全球养禽业带来了巨大经济损失，严重阻碍了全球养禽业的健康发展。疫苗是防控这两种病原体的主要手段，且新型基因工程疫苗是当前疫苗研究的热点。研究表明，Fiber2蛋白和VP2蛋白分别是禽4型腺病毒和鸡传染性法氏囊病病毒的主要结构蛋白，具有较好的免疫原性，是研制基因工程疫苗理想的靶蛋白。复制缺陷型HAdV-5（Humanadenovirusserotype-5）载体是目前基因传递和表达的有效载体，具有安全性好、外源基因负载量大等优点。因此本研究运用AdEasy系统构建了分别表达FAdV-4-Fiber2蛋白和IBDV-VP2蛋白的重组腺病毒并对其免疫保护效果进行了评估，以期为FAdV-4和IBDV基因工程疫苗的研发奠定基础。　　本研究运用同源重组的方法分别将PCR扩增的fiber2和vp2基因克隆至穿梭质粒pAdTrack-GOI中，获得重组质粒pAdTrack-Fiber2和pAdTrack-VP2。随后将限制性内切酶PmeⅠ线性化的pAdTrack-Fiber2和pAdTrack-VP2转化至含有腺病毒骨架质粒的BJ5183感受态细胞中，通过菌内同源重组构建重组质粒pAd-Fiber2和pAd-VP2。用限制性内切酶PacⅠ将pAd-Fiber2和pAd-VP2线性化，并将线性化产物转染至HEK293A细胞，获得分别表达Fiber2蛋白和VP2蛋白的重组腺病毒rAd-Fiber2和rAd-VP2。通过PCR方法可检测到目的基因fiber2和vp2，并且测序完全一致。Westernblot结果进一步表明Fiber2蛋白和VP2蛋白在复制缺陷型HAdV-5载体中成功表达。将重组腺病毒rAd-Fiber2和rAd-VP2纯化后测得滴度分别为7.98×109GFU/mL和6.72×109GFU/mL。　　为评估重组腺病毒rAd-Fiber2和rAd-VP2的免疫保护效果，将纯化后的重组腺病毒rAd-Fiber2和rAd-VP2接种至3日龄SPF鸡，分别于免疫后7d、14d、21d和28d采血检测抗体水平，并于免疫后28d进行攻毒试验。免疫rAd-Fiber2和rAd-VP2的SPF鸡未出现因免疫引起的局部或全身不良反应，说明重组腺病毒的安全性较好。免疫rAd-VP2的SPF鸡在免疫后第21d开始检测到抗体的产生，并继续升高至28d，抗体的增长趋势与商品化IBDV活载体疫苗威力克基本一致，且攻毒保护试验表明，rAd-VP2可有效预防IBDV强毒株的攻击，保护率达100%。免疫rAd-Fiber2的SPF鸡产生的抗体水平明显低于免疫FAdV-4灭活疫苗组，FAdV-4强毒株攻毒后存活率为80%。综上所述，复制缺陷型HAdV-5载体可作为FAdV-4和IBDV免疫原性基因的传递载体，在FAdV-4和IBDV基因工程疫苗研发方面有着广阔的应用前景，对于FAdV-4和IBDV的防控具有重要意义。