关键词： 日本脑炎病毒   序列分析   基因突变   亚单位疫苗   DNA疫苗   原核表达载体   疫苗载体  

摘要： 该研究以方雨玲等分离的日本脑炎病毒（Japanese Encephalitis Virus,JEV）HW株为研究材料,对其5\'端长约3.52kb的致病基因区域进行了克隆,序列分析,分类研究,并构建了相应的原核表达质粒以表达JEV的结构蛋白和抗原蛋白,同时还开发了两种新型JEV核酸疫苗用用于日本乙型脑炎病的防治.这些工作对灭活疫功生产的质量控制,病苗减毒机理的阐明有重要意义,并为日本脑炎诊断试剂盒的开发,亚单位疫苗的核酸疫功的大规模生产以及多价苗,重组活疫苗的研制奠定了基础.

关键词： 杂交水稻   基因工程   中国   育种策略  

摘要： 杂交水稻在我国水稻及粮食生产中占有突出地位 ,基因工程可在杂交水稻育种中发挥重要作用。针对杂交水稻育种存在的主要问题 ,指出应将优质、抗虫和抗病作为当前基因工程育种的研究重点。同时 ,提出基因工程育种与常规育种紧密结合、优质基因工程着重改良保持系及聚合转基因等策略 。

关键词： 鸡新城疫   基因工程疫苗   国际兽疫局   强毒   饲养期   免疫接种   鸡群   商品   最大   养禽业  

关键词： 光动力学疗法   细胞凋亡   卵巢癌   叶绿素衍生物   基因工程抗体   噬菌体抗体   MUC1   制备  

摘要： 全文由两部分组成.一、光动力学疗法抑制人卵巢癌细胞3AO增殖的实验研究.光动力学治疗（Photodynamic therapy,PDT）是利用光敏剂在恶性肿瘤组织内积聚,然后通过合适波长的激光照射产生光化学效应而导致组织损伤.该实验旨在应用CPD4和山东大学光电子研究中心研制的多功能半导体激光医疗仪探讨光动力学治疗对体外培养人卵巢癌细胞株3AO的作用机制.结果表明,PDT-CPD4光动力学治疗明显抑制卵巢癌细胞株3AO的增殖,细胞凋亡为PDT-CPD4杀伤肿瘤细胞的主要机制.二、抗人MUC1基因工程单链抗体的制备.单链抗体（Single-chain Fv Fragment,ScFv）是一种新型的基因工程抗体,其具有分子量小,免疫原性低,组织穿透力强,在非靶向组织中滞留时间短,血液清除快并易于基因操作等优点,已成为肿瘤靶向治疗的一个热点.MUC1是卵巢癌和乳腺癌组织表面的肿瘤抗原,是肿瘤靶向药物理想的靶分子.该实验的目的是制备抗人MUC1基因工程单链抗体,确定可溶性抗体表达部位并筛选表达量高的菌落.应用已构建的抗MUC1-ScFv原核表达质粒C595,将质粒进行提取、纯化,酶切和PCR鉴定.C595转化EoliHB2151表达可溶性单链抗体,其转化培养基需含氨苄青霉素、葡萄糖和萘啶酮酸（nalidixic acid）以保护得到的菌落确实为Nal<\'r>HB2151转导的.ScFv携带C末端13个氨基酸Peptid tag（E-Tag）,它可被Anti-E Tag单克隆抗体识别,因此,用HRP标记的Anti-E Tag抗体进行Western blot,出现蓝色显带的即含抗MUC1 ScFv.带的强弱可定量表达ScFv的细菌部位和量,筛选出表达量最高的菌落,大量扩增制备抗MUC1-ScFv.结果Sfill、Notl分别单酶切质粒C595长度为5308bp,双酶切长度为4522bp和786bp,PCR扩增片段为*** blot结果,可溶性抗体为30KD,未转化菌落和未诱导表达菌落均为阴性;不同菌落Western blot显带强弱不同,同一菌落胞周质可溶抗体含量最高,培养液上清次之,细胞内仅含极微弱可溶抗体.大量筛选了60个菌落,分析后选择表达量最高的第35号菌落,进行大量扩增、诱导表达、提取胞周质可溶性抗体.结论：抗MUC1单链抗体表达于细菌的胞周质液和培养液上清,以胞周质液表达量最高.噬菌体表面呈现技术可大量制备人MUC1噬菌体基因工程单链抗体,以用于靶向治疗.

关键词： 抗肿瘤血管抗体AA98   功能片段   VH/κ   脲浓度梯度柱复性   柱复性   单链抗体   基因工程抗体  

摘要： 利用稀释法、凝胶过滤、脲浓度梯度凝胶过滤 3种方法研究了抗肿瘤血管抗体功能片段VH/κ的体外复性 .通过考察复性液中还原型谷胱甘肽 /氧化型谷胱甘肽 (GSH/GSSG)比例、精氨酸浓度、pH值、洗脱速度、变性液中蛋白质浓度、凝胶过滤脲梯度长度等因素 ,发展了脲梯度凝胶过滤柱复性VH/κ的方法 .结果表明 ,与传统的稀释法和柱复性法相比 ,脲梯度法复性获得的VH/κ的活性回收率和相对亲和力均有显著提高 .

关键词： 基因工程   乳腺癌   人单克隆抗体CM-1   单链抗体   斑点免疫印迹   竞争抑制法  

摘要： 研究解决分泌人单抗的杂交瘤细胞系难于稳定持久分泌抗体的难题 ,制备单链抗体 ,使单抗分子小型化 ,为进一步研究其在肿瘤诊断和治疗中的应用作准备。从分泌抗乳腺癌人单抗的杂交瘤细胞CM 1总RNA中 ,利用RT PCR技术分别扩增出人单抗重链可变区VH 基因和轻链可变区VL 基因 ,将扩增产物纯化后克隆于pGEM T载体中 ,进行DNA测序和序列比较分析后 ,将两者共克隆于表达载体中诱导表达 ,利用斑点免疫印迹及竞争抑制法检测表达产物的抗原性。所克隆的CM 1人单抗重链可变区和轻链可变区基因片段 ,分别属于人免疫球蛋白IgMⅢ亚群 ,和鼠κ轻链V亚群 ,ⅩⅦ家族 ,用斑点免疫印迹法检测可见表达产物能与人乳腺癌细胞特异结合 ;人CM 1单克隆抗体对此单链抗体与人乳腺癌细胞的结合有竞争性抑制作用 ,抑制率为 75 7%。结论成功地制备了可特异结合乳腺癌细胞的CM

关键词： 抗体   基因工程   肿瘤   治疗   单链抗体   抗体融合蛋白   抗独特型抗体   双特异性抗体  

摘要： 综述单链抗体、抗体融合蛋白、抗独特型抗体、双特异性抗体的研究进展 ,显示它们在临床肿瘤治疗方面的良好应用前景。

关键词： 基因工程疫苗   新型乙型肝炎疫苗   研究进展  

摘要： 多年乙型肝炎基因工程疫苗预防接种实践证明 ,疫苗是安全有效的 ,但也存在一些缺点。为了简化疫苗的接种程序 ,提高免疫原性和保护性 ,新型乙型肝炎疫苗正在研究当中。本文就新型乙肝炎疫苗研究进展进行了综述。

关键词： 番茄   乙肝表面抗原   遗传转化   乙肝表面抗原基因   基因工程疫苗  

摘要： 将乙肝病毒表面抗原 (HBs Ag)基因与 Ca MV3 5 s启动子及 nos终止子构建植物表达载体 p1 3 0 1 HBs,直接法转入根癌农杆菌 EHA1 0 5 (Agrobacterium tumefaciens) ,以该菌株介导叶盘法转化番茄 ,得到抗潮霉素的再生植株 .抗性苗总 DNA经 PCR、Southern斑点杂交证实目的基因已整合到番茄基因组中 ,EILSA检测证明在番茄中正确表达了乙肝表面抗原蛋白 .

关键词： 叶绿体基因工程   聚3-羟基丁酸酯   合成  

摘要： 构建了含phbB,phbA,phbC和aadA基因表达盒的叶绿体整合及表达载体,通过基因枪轰击法转化烟草.对具壮观霉素抗性的植株进行PCR和Southern等分析,确证外源基因已整合到叶绿体基因组中,同时测定了其同质化程度.Northern点杂交、RT-PCR分析结果表明,叶绿体型转基因植株中目的基因在转录水平的表达明显高于核转化植株中相应基因,并且未观察到基因沉默现象.叶绿体型转基因植株还具有环境安全性好、底物丰富、产物区域化等优点,表明叶绿体基因工程在转基因植物生产聚3-羟基丁酸酯（PHB）方面极具潜力.