关键词： 杨树   基因工程   抗性育种   遗传改良  

摘要： 综述了杨树基因工程在抗虫、抗病以及耐盐碱基因转化方面的研究进展 ,提出了当前杨树基因工程中存在的问题 ,并展望了基因工程在杨树遗传改良中应用的前景。

关键词： 草莓   育种   植物基因工程   技术原理  

摘要： 根据植物基因工程的技术原理 ,在培养抗病毒、耐贮藏、抗除草剂、高甜度、抗真菌草莓新品种方面提出了见解 ,期望借助植物基因工程技术为草莓育种服务。

关键词： 叶绿体   遗传转化   基因工程  

摘要： 叶绿体(质体)基因转化技术由于其独特的优越性,已开始成为植物基因工程中新的研究热点。本文就目前叶绿体基因工程进展及其应用作一简单的综述,涉及转化载体的构建、遗传转化系统、转化子的同质化和叶绿体基因工程的应用。

关键词： 免疫佐剂   研究进展   合成肽疫苗   基因工程疫苗   核酸疫苗   转基因植物口服疫苗  

摘要： 目前正在开发的新型疫苗有合成肽疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗、转基因植物口服疫苗等,这些新型疫苗具有良好的抗原特异性和低毒性.但由于其抗原分子小、纯化程度高,疫苗的免疫原性较差.因此需要安全有效的佐剂来增强疫苗的效力.近年来佐剂的发展迅猛,多种新型佐剂层出不穷,人们对佐剂的作用机理亦有更深入的认识.本文对近年来佐剂的研究进展作一综述.

关键词： 抗人肝癌基因工程   抗体   sp2/0细胞   基因表达   生物学活性  

摘要： 目的　构建抗人肝癌嵌合抗体 ,并在Sp2 0细胞中进行稳定高效表达。方法　分别将HAb18轻、重链可变区基因克隆入真核表达载体pDHL构建重组载体pDHL chHAb18。酶切及测序鉴定后 ,转染Sp2 0细胞 ,经甲氨蝶蛉 (MTX)筛选获得抗性克隆。采用有限稀释法单克隆化后持续MTX加压培养。通过ELISA筛选高效表达的单克隆细胞株。表达产物纯化后 ,进行SDS PAGE和Westernblot检测 ,同时采用ELISA和免疫荧光法检测其抗原结合特异性。结果　成功构建了重组嵌合IgG抗体chHAb18的真核表达载体pDHL chHAb18。转化Sp2 0细胞后 ,初步筛选得到了高效表达chHAb18的细胞株。经MTX加压培养 ,1株细胞的chHAb18表达量达到 10mg L。SDS PAGE和Westernblot检测结果表明 :目的蛋白分子质量约为 16 0× 10 3,还原后为 2条带 ,分子质量约为 5 2× 10 3和 2 7× 10 3。上述蛋白条带均与羊抗人IgG抗体特异结合。结论　成功构建了抗人肝癌基因工程嵌合抗体chHAb18,并在骨髓瘤细胞中获得高效表达。为其进一步的应用研究奠定了基础。

关键词： 猪脂肪细胞   噬菌体展示   基因工程抗体  

摘要： 随着人们对健康问题的日益重视,减少动物体内过量的脂肪已成为人们普遍关注的问题.过量的脂肪不仅降低了肉的品质,而且不利于人类健康.人体摄入过量的动物性脂肪会导致肥胖症和心脑血管疾病,对人体的健康危害极大.因此,研究人员一直在探索降低动物体脂的有效方法.其中研制和应用抗猪脂肪细胞膜抗体是一个重要手段.可以解决药物残留问题,有益于人类健康.该研究的获取抗猪脂肪细胞膜抗体的轻、重链基因,构建单链抗体基因,利用噬菌体展示技术制备噬菌体抗体,并在大肠杆菌中进行可溶性表达,获得具有对猪脂肪细胞结合活性的表达产物,为以后的进一步应用奠定基础.该研究采用一种新的免疫方法-删减免疫法免疫动物,从经猪脂肪细胞免疫的小鼠脾脏中提取mRNA,以此为模板反转录为cDNA第一链,以小鼠抗体重链可变区VH和轻链可变区VL特异性引物RT-PCR扩增VH、VL基因片段,经重叠引物延伸PCR (SOE-PCR)把VH与VL用编码(Gly4Ser)3连接肽序列的Linker连接成单链抗体ScFv基因,克隆入噬菌粒pCANTAB5E载体,并转化*** TG1感受态细胞,在SOBAG平板上筛选转化子,并用M13KO7超感染,获得了抗猪脂肪细胞膜噬菌体抗体文库.经猪脂肪细胞进行三轮淘选后,ELISA筛选检测、酶切鉴定富集后克隆,得到阳性重组噬菌体抗体克隆.用阳性重组噬菌体抗体,感染不含琥珀抑制基因的*** HB2151,经IPTG诱导,获得了可溶性表达的抗猪脂肪细胞膜单链抗体.表达产物经ELISA鉴定表明其具有与猪脂肪细胞结合的活性和特异性.SDS-PAGE检测在约30KDa处有一新生条带形成,与预期大小相符.用未经免疫的多种小鼠的脾细胞作为基因来源,提取RNA,反转录为cDNA第一链,以合成的小鼠重、轻可变区基因VH、VL引物,RT-PCR扩增其天然抗体的重链基因VH和轻链基因VL,用含有15肽的Linker引物,对VL基因进行PCR扩增修饰后,然后与VH基因通过重叠延伸拼接反应(SOE-PCR),组装成单链抗体基因(ScFv),克隆入噬菌粒pCANTAB5E载体,并转化*** TG1感受态细胞,在SOBAG平板上筛选转化子,并用M13KO7超感染,构建了天然鼠源噬菌体抗体库.经猪脂肪细胞和猪IgG筛选,获得了抗猪脂肪细胞膜ScFv和抗猪IgG ScFv.天然鼠源噬菌体抗体库的构建为筛选和制备各种抗体提供了一个平台.猪脂肪细胞膜重组噬菌体抗体库的构建,为进一步筛选具有高亲和力、高特异性的基因工程抗体打下了良好的基础.抗猪脂肪细胞膜基因工程抗体的研究,为进一步分离和发现这些抗体所识别的猪脂肪细胞表面分子提供了新的工具,可为研究猪脂肪细胞分化机理提供有价值的线索;对减少猪的脂肪含量,提高胴体品质,促进动物生长,具有重要的实际应用价值.

关键词： 基因工程   水稻   育种   种质资源   引种   基础研究  

摘要： 水稻是我国第一大作物,也是世界上最重要的禾谷类作物之一,包括大多数发展中国家在内,约占世界总数40%的人口,其主要营养来源于水稻.

关键词： 犬   冠状病毒V1株   纤突蛋白基因   基因克隆   序列分析   基因工程疫苗  

摘要： 首次对犬冠状病毒(CCV)V1株纤突蛋白(S)基因进行了克隆和测序。根据GenBank中报道的CCVV54株S基因序列,设计了一对特异性引物,对CCVV1野毒株S基因进行了RT-PCR扩增。将扩增得到的PCR产物纯化后克隆到pGEM-T中得到重组质粒pTS,用于序列测定。结果该基因全长4362bp,编码1453个氨基酸,N端前18个氨基酸为推测的信号肽序列,后1435个氨基酸构成成熟蛋白。将V1株S全基因与GenBank中已发表的6个CCV毒株S基因进行了比较,结果核苷酸序列同源性在91.0%～99.0%之间;推导的氨基酸序列同源性在93.0%～99.0%之间;同时发现CCV变异区主要集中在S基因前1/2处,其中350-370、439-478、1718-1818三个区域碱基变异较大,而1060-1700区碱基却十分保守。基于S全基因聚类分析结果表明,S基因分型结果与CCV毒力强弱并不一致;V1野毒株推导的S蛋白潜在的N-联糖基化位点与CCVV54强毒相同,均为34个,比Insavc-1弱毒多一个;其中第566-568位糖基化位点是多数强毒拥有而弱毒Insavc-1没有的。推导的V1株S蛋白疏水性及抗原表位与Insavc-1株有一定的差异,这些差别对病毒致病性和免疫原性等影响需进一步的研究。

关键词： 禽流感病毒   禽流感疫苗   疫苗种类   多价疫苗   生物安全措施   雏禽   基因工程疫苗   疫苗株   二价   饲养期  

关键词： 鳜   传染性脾肾坏死病毒   主要衣壳蛋白   原核表达   DNA疫苗   真核表达   基因工程  

摘要： 近年来，频频暴发的鳜流行性疾病对广东省的鳜养殖业造成很大危害。对该流行性疾病的研究表明，其主要病原是传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus, ISKNV)。组织浆疫苗对预防鳜ISKNV病有一定的效果，但是材料来源有季节性和数量上的限制，且成本较高，不利于推广，目前还无法获得细胞灭活疫苗和弱毒疫苗，进行基因工程疫苗的研究则可为鳜ISKNV病的预防提供新的思路。研究表明，主要衣壳蛋白（major capside protein, Mcp）是病毒粒子的主要抗原蛋白。本实验克隆了ISKNV Mcp基因；进行了Mcp基因的原核表达；制备了抗重组Mcp的抗血清；构建了重组Mcp基因的DNA疫苗(pcDNAMcp)并对其进行了表达研究。具体研究内容包括：\n 1 ISKNV Mcp基因的克隆与序列分析\n 根据鳜传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)主要衣壳蛋白（Mcp）基因序列设计引物，PCR扩增得到一长约1400bp的DNA片段， 将其克隆到pGEM-T Easy Vector。对重组子进行序列测定，测序结果表明所克隆的片段为ISKNV Mcp基因，它含有一个1362bp的开放读码框（ORF），编码454个氨基酸，推算的Mcp分子量为49.665kDa，等电点（pI）为6.01。氨基酸亲水性分析表明，在150-250位氨基酸之间亲水性很高，可能构成主要抗原决定簇。\n 2 ISKNV Mcp基因的原核表达及重组 Mcp 的免疫原性分析\n Mcp基因经PCR改造后克隆至原核表达载体pBV220，构建表达Mcp的大肠杆菌基因工程菌，该工程菌经42℃诱导，SDS-PAGE检测，在约50kDa处有一特异蛋白带，含量约为菌体总蛋白的23％。用纯化和复性后的重组Mcp免疫新西兰大白兔制备抗血清，Western blotting分析显示，重组Mcp制备的抗血清能与ISKNV Mcp特异结合，说明表达产物具有与ISKNV Mcp相似的抗原特性。\n 3 含ISKNV Mcp 基因的DNA疫苗的构建及其表达研究\n 利用PCR方法对Mcp基因进行改造，改造后的Mcp基因克隆到真核表达载体pcDNA3.