关键词： 禽流感病毒   生猪   GMP   标本   流感病毒群   兽用生物制品   肉品检验   食品检验   基因工程疫苗  

摘要： 禽流感快速诊断试剂问世 记者从汕头大学医学院／香港大学医学院联合流感研究中心获悉,经该中心与厦门大学近半年时间的联合研制,世界首个禽流感病毒H5N1快速诊断试剂盒近日问世。采用这种快速检测法检测疑似者的标本,最快在一个小时内就可得出是否感染禽流感病毒的结论。

关键词： 轮状病毒   VP6 基因   重组腺病毒   免疫效果   (G+C)%   优化合成   基因工程疫苗  

摘要： 轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起全世界婴幼儿和幼龄动物严重腹泻的最重要、最常见的病原。在发展中国家,每年因RV 感染发生中度和严重腹泻以及死亡的儿童高达1887 万人;在发达国家,因RV 感染造成的经济损失是一个不容忽视的问题。据估计美国每年就此一项的医药损失高达2 亿6 千万美元。鉴于RV 危害严重且无有效的治疗手段,世界卫生组织(WHO)将RV 疫苗列为最优先发展的疫苗项目之一。目前正在研制的候选RV 疫苗包括重组或减毒疫苗、灭活疫苗、病毒样颗粒(VLPs)疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗和转基因植物疫苗等,动物实验表明这些疫苗的免疫保护效果差异较大,因此对于新型RV 疫苗的研究仍在探索之中。 A 组RV 血清型众多,疫苗研究实践表明,包含中和性抗原的多价疫苗的效果要好于单价疫苗。为了探索以非复制型腺病毒为表达载体的多价RV 基因工程疫苗的可行性,我们在前期获得了表达我国A 组RV G1 型、G2 型和G3 型流行毒株VP7 基因的非复制型重组腺病毒rvAdG1VP7、rvAdG2VP7 和rvAdG3VP7,并对其免疫效果进行了研究,均获得了良好的免疫效果。RV VP6 蛋白是其主要的组特异性抗原,有较强的抗原性和免疫原性,可诱导保护性免疫。研究表明,VP6 蛋白的IgA 单克隆抗体对RV 感染具有免疫保护作用,肌注免疫VP6 DNA疫苗可产生较好的异源保护作用,以VP6 蛋白和黏膜佐剂免疫小鼠可诱导产生对鼠RV EDIM 株的完全保护作用。为了获得更有效的RV基因工程疫苗,我们在前期构建了表达我国A 组RV VP6 基因的非复制型重组腺病毒rvAdVP6。 本论文在上述工作的基础上,对轮状病毒重组腺病毒疫苗rvAdVP6 的免疫效果进行了研究。获得了以下结果: 1.将非复制型重组腺病毒疫苗rvAdVP6 经滴鼻和灌胃两种途径免疫Balb/c 小鼠两次,对免疫后小鼠的血清IgG抗体水平和相关的细胞因子水平进行了检测。结果表明,用rvAdVP6经滴鼻和灌胃两种途径免疫Balb/c小鼠后均可诱导机体产生较强的RV特异性全面免疫应答,包括体液免疫和细胞免疫,但主导免疫反应与免疫途径有关。与相应的对照组相比,灌胃免疫组小鼠产生的IL-4 水平明显高于滴鼻组,而滴鼻免疫组小鼠产生的IFN-? 水平明显高于灌胃组,由此可推测rvAdVP6 滴鼻免疫组小鼠可能产生以Th1型免疫反应为主的全面免疫应答,而rvAdVP6 灌胃免疫组小鼠可能产生以Th2 型免疫

关键词： 中长链羟基脂肪酸聚酯   叶绿体基因工程   植物生物反应器   转基因烟草   母性遗传   叶绿体同源片段   GFP   甘薯  

摘要： 羟基脂肪酸聚酯(polyhydroxyalkanoates，PHAs)属于微生物聚酯，在生物体内主要作为细胞内碳源和能源的贮藏性物质存在，它不但具有与化学合成塑料相似的物理、机械特性，而且具有完全的生物可降解性和良好的生物相容性，被认为是石油化工聚酯的理想替代品。中长链羟基脂肪酸聚酯(medium-chain-length-PHAs，mcl-PHAs)是几种中长链的羟基脂肪酸结构单体的共聚物，比短链羟基脂肪酸聚酯(short-chain-length-PHAs，scl-PHAs)具有更好的物理、机械特性。微生物发酵法生产的PHAs价格过高，无法在市场上与石油化工聚酯竞争。随着分子生物学的发展，人们逐渐将视线转向转基因植物，将细菌中的PHAs合成途径引入植物，利用植物作为生物反应器生产PHAs。 高等植物叶绿体基因工程是植物基因工程发展的新领域，是近十年才开始兴起的一种新的转基因途径，具有传统核转化技术所不具备的独特魅力，已经成为植物基因工程领域研究的热点，因而自问世以来迅速在基础研究和实践应用等方面显示出旺盛的生命力，尤其在以叶绿体为生物反应器合成目标产物方面应用广泛。 本研究通过PCR方法从水稻叶绿体基因组中克隆了叶绿体基因psbA的启动子和终止子以及rbcL基因的3’-端调控序列;从烟草叶绿体基因组中克隆了psbA基因的3’-端调控序列和两段叶绿体同源片段。以aadA(编码氨糖苷-3’-磷酸转移酶)基因做筛选标记，分别构建了含phaC2基因的单价叶绿体遗传转化表达载体pTC2以及同时嵌合phaC和phaG基因的双价叶绿体遗传转化表达载体pTGC，基因枪转化法转化烟草，获得具有壮观霉素(Spectinomycin，Spc)抗性的转pTC2的阳性植株5个、转pTGC的阳性植株6个。对T代和T代转基因烟草的PCR和Southern blot鉴定结果表明，外源基因确已整合进烟草叶绿体基因组中，T代转基因植株已完全达同质化。RT-PCR分析结果证实aadA和phaC基因已在转录水平上表达。转基因植株的正反交试验证明外源基因在转基因烟草后代中遵循母性遗传规律，不存在转基因的花粉漂移现象。气相色谱法检测转基因株系中的mcl-PHAs含量最高达4.8mg/g干重(株系S4-3)，合成的mcl-PHAs单体主要成分为3-羟基辛酸(3-hydroxyoctanoate，3-HO)和3-羟基癸酸(3-dydroxydecanoate，3-HD)。只转化phaC2基因的叶绿体型转基因烟草基本检测不到有mel-PHAs合成，共表达phaC和phaG基因的叶绿体型转基因烟草则能合成相对较高水平的mcl-PHAs。透射电镜观察到转基因烟草叶绿体中确有

关键词： 阿尔茨海默病   淀粉样蛋白   原核表达   B细胞表位   基因工程疫苗   认知能力损害  

摘要： 　　本文为了降低Aβ疫苗的毒性同时降低大规模生产Aβ疫苗的成本，在设计上减少了T细胞的抗原决定簇，保留了B细胞的抗原决定簇，去除Aβ的毒性片段，用基因工程的方法制备四价Aβ亚单位疫苗，研究其引起体液免疫的效果。 　　本文通过基因合成和PCR扩增技术，得到多个甘氨酸连接的Aβ1-15二价B细胞抗原表位基因片段；再用GSGGSGlinker串联这两段Aβ1-15二价基因片段，命名为4×Aβ15，克隆入pcDNA3.1表达载体，构建成功了pcDNA3.1-s4×Aβ15真核表达质粒。 本文成功构建了原核表达载体pGEX-4×Aβ15，并成功表达出可溶的GST融合4×Aβ15蛋白，证实了基因工程原核表达的四价亚单位疫苗的生物学活性，为下一步选择合适的表达载体，生产出具有更低成本更低毒性的Aβ疫苗奠定了科学的实践基础。 　　

关键词： 沂蒙黑猪   商品肉鸡   挤奶机器人   克隆山羊   基因工程疫苗   荷斯坦种公牛   新型饲料   信息博览  

关键词： 口蹄疫   基因工程疫苗   DNA疫苗   抗原决定簇   RNA病毒  

摘要： 1 综述部分:FMDV的结构及流行病学 口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是当今最为严重的家畜传染病之一,长期以来,FMD在世界范围内的爆发和流行造成巨大的经济损失。FMD的致病原为FMD病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV),FMDV的结构和成分较为简单,成熟的病毒粒子由4种衣壳蛋白VP、VP、VP及VP各60个拷贝构成衣壳包裹单股正链RNA组成。根据免疫原性,有A、O、C、SATⅠ、SATⅡ、SATⅢ及AsiaⅠ共7个血清型。口蹄疫病毒以直接接触和间接接触的方式传染。直接接触主要通过消化道感染,也可经由皮肤或粘膜侵入引起偶蹄动物传染该病。间接接触主要通过携带病毒的空气尘埃或病毒以气溶胶的形式传播,常造成长距离的跳跃式传播。 2 研究部分 共三章 第一章 抗O型口蹄疫病毒与A型口蹄疫病毒的双价基因工程多肽疫苗 因为O型FMDV和A型FMDV是许多国家常见的病毒型,对畜牧业造成的危害相当严重,因此研制抗O型FMDV和A型FMDV双价基因工程多肽疫苗有重要的实践意义,但是尚未见到抗O型和A型FMDV双价基因工程多肽疫苗的报导。 我们以O型FMDV和A型FMDV VP蛋白的主要抗原决定簇构成多肽疫苗,化学合成编码O型FMDV VP蛋白中21～40位及141～160位氨基酸残基的核苷酸

关键词： 原发性干燥综合征   抗血小板膜糖蛋白自身抗体   抗血小板自身抗体   基因工程抗体   抗体库   抗体Fab 段   噬菌体表面呈现技术   特发性血小板减少性紫癜  

摘要： 自身免疫性疾病（autoimmune disease,AID） 是指以自身免疫反应导致组织器官损伤和相应功能障碍为主要发病机制的一类疾病。血小板减少及血栓形成是自身免疫性疾病的常见临床表现,血小板减少的原因可以是由于抗血小板抗体的存在使血小板破坏过多,也可以是由于自身免疫性疾病血管内皮细胞损伤,继而出现血小板活化、血栓形成,使血小板消耗过多所致。本实验对自身免疫性疾病与抗血小板自身抗体进行研究,以期揭示血小板膜糖蛋白自身抗体在自身免疫性疾病血小板减少发病中的作用,并以自身免疫性血小板减少患者为研究对象,构建噬菌体抗体库,筛选人源性血小板膜糖蛋白IIb/IIIa 抗体,为探索新型抗血栓药物奠定基础。 一、自身免疫性疾病患者的血小板膜糖蛋白自身抗体的研究 1.研究背景及目的 血小板减少是自身免疫性疾病的常见症状,抗血小板自身抗体在自身免疫性疾病血小板减少发病中发挥重要作用。原发性干燥综合征（primary Sjogren syndrome, pSS） 是一种慢性炎症性的自身免疫性结缔组织疾病,在我国发病率为0.29%～0.77% ,为结缔组织病的首位。pSS 主要影响外分泌腺,也影响非外分泌腺组织。pSS 患者可出现pSS 相关的多种血液系统损害（贫血、白细胞减少、血小板减少等）。pSS 患者伴血小板减少的发生率,国外报道为5%～7%,国内报道为23%。本研究对pSS 患者血浆血小板膜糖蛋白自身抗体进行检测,探讨pSS 患者血小板减少的发生机制。 2.研究方法 利用抗血小板膜糖蛋白（GP）单抗SZ-2（抗GPⅠb）、SZ-21（抗GPⅢa）、SZ-51（抗P-selectin）及7E3（抗GPⅡb/Ⅲa）,采用ELISA 方法对70 例pSS 患者（血小板计数正常者38 例,血小板减少者32 例）血浆血小板膜糖蛋白自身抗体水平进行检测,同时以32 例特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者血浆为阳性对照,以35 例健康

关键词： 口蹄疫病毒   单克隆抗体   双抗体夹心ELISA   抗原检测   基因工程疫苗   免疫原性  

摘要： 口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的偶蹄动物共患的急性接触性传染病,人也可以感染。本病有极强的传染性,可形成大范围流行,造成巨大的经济损失和政治影响。预防和控制该病的关键是高效疫苗和准确的诊断方法的应用。目前用于口蹄疫的诊断技术种类很多,而传统ELISA大多用于检测抗体,其抗原需要完整的病毒,生产过程需要昂贵的培养基,成本高,且存在散毒的危险。检测病毒是确诊病毒感染的标准,单抗具有特异性高的特点,因此基于单抗而建立的诊断方法具有重要的应用前景。此外,有研究表明,将口蹄疫具有免疫原性的结构蛋白基因和裂解酶基因(3C基因)连接起来构建的多抗原基因表达载体,表达后与单一的免疫原性基因相比,具有较高的免疫原性。本研究开展了抗口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及初步应用研究和口蹄疫病毒免疫原蛋白在大肠杆菌的融合表达。 1 抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备和初步应用 以纯化的O型FMDV为免疫原,免疫BALB/C小鼠,将脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/O融合,用ELISA筛选获得2株分泌抗O型FMDV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,分别命名为2G12和2G8。染色体数目分析证明为杂交产物,免疫荧光试验证明两株单抗均能特异性地与FMDV反应。选择其中效价较高的1株(2G12)用于下列实验。以自行制备的兔抗FMDV高免血清IgG为捕获抗体,包被酶联免疫吸附试验微量反应板,以单抗2G12为检测抗体,建立了快速检测FMDV抗原的双抗体夹心ELISA。该方法能检出90ng/100μL FMDV病毒,与猪瘟病毒(HCV)、猪呼吸与繁殖障碍综合症耳病病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PrV)、猪细小病毒(PPV)和乙脑病毒(JEV)均不起反应。本研究为检测口蹄疫病毒抗原提供了灵敏和特异的方法。 2 口蹄疫病毒多抗原基因(VP1-VP3-3C)在大肠杆菌中的融合表达 应用PCR扩增技术获得1564bp的片段,包含口蹄疫病毒VP1全长基因、VP3部分基因和编码3C裂解酶的全长基因,连接到pMD-18T载体上,在获得重组质粒pMD-18T-VP1-VP3-3C后,进行序列分析;将此片段连接到Pgex-KG载体,构建了重组表达质粒pKG-VP1-VP3-3C,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,收集菌体进行SDS-PAGE电泳,结果表明,VP1-VP3-3C基因在大肠杆菌中获得成功表达,其表达产物为分子量83KDa的融合蛋白,并且能与猪

关键词： 传染性法氏囊病   基因工程疫苗   研究进展  

摘要： 综述了导致近年来传染性法氏囊病(IBD)疫苗免疫发生重大变化的主要原因,即:传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒株的出现和IBDV分子生物学研究和分子克隆技术与手段的长足进步。介绍了目前IBD基因工程疫苗的4种主要类型:活病毒疫苗、DNA疫苗、亚单位疫苗、可食用转基因植物疫苗。

关键词： 基因工程疫苗   禽类   传染病   发电厂   传染性疾病   疾病   电厂   流感病毒群   禽流感病毒   火鸡   动物性饲料   蛋壳粉   鸡传染性腔上囊炎   鸡传染性法氏囊病   高致病性禽流感