关键词： 毕赤酵母表达系统   JR23株   风疹病毒   抗原性分析   SDS-PAGE   Western   包膜糖蛋白E1   E1包膜糖蛋白   重组蛋白   基因工程疫苗   blot   抗体反应   诊断试剂盒   单克隆抗体   免疫反应性   结构功能   E1蛋白   LiCl   表达质粒   E1基因   不同时间  

摘要： 目的　在毕赤酵母表达系统中表达风疹病毒 (rubellavirus ,RV)JR2 3株包膜糖蛋白E1 ,为研究E1蛋白的结构功能、开发基因工程疫苗和重组蛋白诊断试剂盒奠定基础。方法　E1基因的表达质粒 pGAPZαA E1经AvrⅡ线性化后用LiCl法转化酵母菌 ,在YPD(含 1 0 0 μg/mlZeocinTM)平板上两次筛选 ,挑出单菌落 ,于液体YPD中培养 ,并在不同时间收集培养物 ,用SDS PAGE和Westernblot进行分析。结果　SDS PAGE显示E1重组蛋白在毕赤酵母中高效稳定表达 ,在 4 8h时表达量达到最高 ,之后趋于稳定 ,上清和细胞中均有蛋白表达。Westernblot结果表明 ,上清中的E1重组蛋白能够分别与抗RV的阳性血清和单克隆抗体反应 ,而细胞中的E1重组蛋白只能与抗RV的阳性血清反应 ,不能与单克隆抗体反应。这说明所表达的蛋白一部分在信号肽的引导下分泌出胞 ,并经过折叠形成了正确的构像 ,能够与单克隆抗体结合 ;而另一部分由于蛋白本身的跨膜区连在了细胞膜上没有分泌出去 ,没有形成能够被单抗识别的构像 ,不能与单抗结合。结论　E1包膜糖蛋白在酵母菌中成功表达 ,且免疫反应性良好。

关键词： 体外表达   脂多糖结合蛋白   抗体库   筛选   构建   基因工程   外周血单核细胞   氨基   单链抗体   可变区   总RNA   人源化   片段   特异性   技术   健康人   高度   翻译   连接   引物   进化  

摘要： 目的构建人源化的单链可变区抗体库,运用体外表达技术翻译并筛选特异性的抗NHLBP抗体。方法分离健康人外周血单核细胞,抽提总RNA设计引物,扩增抗体轻重链的可变区,通过一段柔性片段将其连接成单链抗体库;应用体外表达技术翻译抗体库,并筛选出与NHLBP高度结合的单链抗体片段。结果扩增的单链抗体可变区片段分别为340bp和325bp,经连接后约为750bp。经过体外表达得到了约27000的抗体片段,经过5轮筛选进化,得到了可与NHLBP高度结合的抗体。结论已成功构建了人源化的单链抗体库;通过体外表达技术筛选到可与NHLBP高度结合的抗体。

关键词： 猪   口蹄疫   基因工程疫苗   发酵罐   作用机理  

摘要： 我国首个猪口蹄疫基因工程疫苗研制成功,该基因工程疫苗的诞生将开辟我国猪口蹄疫的防治新途径.据该课题组早在1982年就在上海农科院畜牧所开始筹建研究组,开展猪口蹄疫基因工程疫苗的研究.此后,在国家科委攻关项目和'863'高科技发展计划等系列重点项目的资助下,参加科研协作的研究单位又扩大到浙江农科院病毒所和中国农科院兰州兽医所.科研人员经过长达20多年的研究和试验,终于研制出了抗O型口蹄疫病毒基因工程疫苗.其原理是:把病毒中有免疫源性或免疫功能的基因片段取出,与大肠杆菌的蛋白质结合,使大肠杆菌带有口蹄疫的免疫功能.研究发现,动物在注射该疫苗后,即使受到此自然病毒强数百倍的病毒攻击,也安然无恙.由于该疫苗不是用灭活的病毒制成,不带任何感染性病毒,因此既不会引起感染,也无副作用,相当安全有效.

关键词： 猪瘟病毒   基因工程疫苗   标记疫苗   基因组结构   栽体   亚单位疫苗   组成   研究进展   研究现状   产物  

摘要： 本文着重介绍了猪瘟病毒基因组结构组成、基因组产物和以基因组为研究对象开展的亚单位疫苗、活载体疫苗、标记疫苗等新型基因工程疫苗的研究现状。

关键词： 新型疫苗   研究进展   基因工程疫苗   重组亚单位疫苗   兽医生物制品   细胞疫苗   免疫学技术   生物技术   制造技术   动物疫病   生理调控   肿瘤疫苗   核酸疫苗   活载体   治疗性   应用   预防  

摘要： 近20年来．随着生物技术在兽医生物制品领域应用的不断深化和发展，疫苗制造技术和免疫学技术得到迅猛发展．产生了多种新型疫苗，包括基因重组亚单位疫苗．活载体基因工程疫苗、基因工程缺失疫苗和植物转基因工程疫苗等。此外，疫苗除应用于预防动物疫病外．新技术已将其扩展到治疗性疫苗、肿瘤疫苗和生理调控疫苗等。核酸疫苗、T细胞疫苗和树突状细胞疫苗彻底改变了疫苗多为蛋白．只能预防的经典概念，

关键词： 伪狂犬病病毒   活载体疫苗   基因缺失疫苗   种畜   基因工程疫苗   防制   脑脊髓炎   主要症状   研究进展   发热  

摘要： 伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的多种畜、禽及野生动物的一种以发热、奇痒、脑脊髓炎为主要症状的急性传染病。该病每年给养猪业造成的损失达数十亿美元,目前对该病主要是以疫苗防制为主。随着基因工程技术的不断更新和发展,研制更加安全、有效的基因工程疫苗对该病的防治将会有重要的意义。文章对伪狂犬病基因缺失疫苗及活载体疫苗的研究进行了综述。

关键词： 番茄   黄瓜花叶病毒   基因工程  

摘要： 对番茄抗黄瓜花叶病毒基因工程育种的研究进展进行了总结,其主要包括利用病毒外壳蛋白、病毒复制酶、病毒星RNA和天花粉蛋白基因等,讨论了番茄抗黄瓜花叶病毒基因工程育种的发展方向及前景。

关键词： 基因工程   单链抗体   表达  

摘要： 在基因工程理论基础上,对单链抗体基因的获取、构建、表达及其在医疗方面的应用进行了分析,为单链抗体在食品、农业等领域的应用奠定理论基础。

关键词： 宿主   抗原编码基因   基因工程疫苗   痴皮   表皮   皮肤   基因序列  

摘要： 疥螨病通常是指由疥螨科、疥螨属的疥螨(Sarcoptesscabiei)寄生于人和其他哺乳动物皮肤表皮内,引起称为疥疮(又称疥癣、癞病)的一种顽固、接触性、传染性皮肤病,其以剧痒、结痂、脱毛和皮肤增厚为特征。

关键词： 基因工程疫苗   禽类传染病   中国   自主知识产权   湖北省   专家组   科技厅  

摘要： 湖北省长江大学历时5年攻关，研制出中国首剂禽类传染病基因工程疫苗。湖北省科技厅组织的专家组日前经鉴定认为，该研究项目总体达到国际先进水平，拥有完全自主知识产权，具有重大应用价值。