关键词： 疫苗研究   血吸虫病   基因工程疫苗   传染性疾病   血吸虫疫苗   亚单位疫苗   20世纪   死疫苗   活疫苗   控制  

摘要： 疫苗是控制传染性疾病的有效手段,20世纪初人们曾设想研制血吸虫疫苗来预防和控制血吸虫病.血吸虫疫苗研究的历史,经历了从死疫苗、致弱活疫苗、亚单位疫苗到基因工程疫苗等的探索过程.

关键词： 痘苗病毒   基因工程抗体   噬菌体展示技术   Fab  

摘要： 首先，我们进行了抗VACVFab噬菌体抗体库的构建。我们先采集具有高滴度VACV抗体的免疫鼠脾，分离淋巴细胞，然后进行总RNA的提取以及cDNA的合成，接着用一系列特异性的PCR引物通过PCR扩增特异性轻链基因和重链Fd段基因，在对PCR产物鉴定和纯化后，用轻链混合物与噬菌粒pComb3构建轻链库，随后随机挑选克隆进行轻链插入率鉴定，在确保轻链库的质量后，将重链混合物克隆入轻链库中构建Fab噬菌体抗体库，同样随机挑选克隆进行重链插入率鉴定。最后使用辅助噬菌体对Fab噬菌体抗体库进行包装，检测库容量，结果表明我们所构建的Fab噬菌体抗体库的容量为2×107，轻链插入率和重链插入率分别为100％和90％，足以满足我们筛库的需要。\n　　在成功构建Fab噬菌体抗体库的基础上，我们用纯化的VACV病毒对Fab噬菌体抗体库进行富集，目的是扩大筛选范围，有效地筛选出特异性抗VACVFab抗体。随机挑选50个3次富集筛选后的单菌落对其进行了诱导表达，并通过ELISA进行筛选，共获得10株阳性克隆，这10株克隆均有较高的Fab表达，其中3株与纯化VACV有特异性的结合，其生物学功能还需进一步研究鉴定。\n　　本文进行了鼠源抗VACVFab噬菌体抗体库的构建及抗体库的初步筛选，为下一步Fab抗体生物学功能鉴定及全抗体的制备奠定了基础。

关键词： 鸡   动物疾病   传染性法氏囊病   基因工程   疫苗接种   基因序列   免疫应答  

摘要： 传染性法氏囊病毒感染主要采用疫苗进行预防。近年来由于变异毒株不断出现,给疫病预防带来困难,因此,人们积极投向基因工程疫苗的研究。本文综述了基因工程疫苗的研究进展。

关键词： 空肠弯曲菌   黏附蛋白   疫苗   神经损伤  

摘要： 目的以空肠弯曲菌(campylobacterjejuni,CJ)菌体全抗原为对照,以基因重组的该菌融合黏附蛋白(TrxA/PEB1)作为CJ疫苗免疫大鼠,并对其神经安全性进行实验性评价。方法分别以纯化的TrxA/PEB1和CJPen19菌体全抗原经全身免疫增强法免疫大鼠,初次免疫后第2、4、5周采用ELISA法动态观察抗体滴度,并分别于第3、5周分离坐骨神经原纤维及行甲苯胺蓝染色光镜观察。采用ELISA法检测第5周抗血清与GM1抗原的结合反应。神经外膜下注射抗TrxA/PEB1和抗CJ全菌抗原的特异性抗血清,观察其神经病理学改变。结果(1)经两种抗原免疫后,大鼠均产生高滴度特异性IgG,且各自与两种抗原发生交叉反应;(2)以CJPen19全抗原免疫后抗血清可与GM1抗原结合,而TrxA/PEB1免疫者则否;(3)CJPen19免疫组有60%大鼠坐骨神经出现以轴索变性为主的免疫性损伤,而TrxA/PEB1融合蛋白免疫者则未发生;(4)CJPen19免疫血清神经外膜下注射后全部大鼠均发生轴索变性为主的病变,且75%为显著病变,而TrxA/PEB1免疫血清外膜下注射后却未引起明显病变。结论CJPen19全菌抗原和TrxA/PEB1纯化蛋白作为免疫原均可激发大鼠有效体液免疫应答,但与CJ全菌抗原相比,TrxA/PEB1蛋白所产生的全身免疫反应未引起周围神经损伤,其抗血清不含针对GM1抗原的抗体。

关键词： 基因工程   受体系统   转化方法   水稻   育种  

摘要： 随着生物工程技术的发展,基因转化技术日趋成熟,转化频率逐渐提高,应用基因工程手段改良水稻品种已逐渐变为现实,并显示出诱人前景。综述了水稻基因工程原理、转化受体系统、转基因方法及其在育种上的应用的研究进展。

关键词： 伪狂犬病   基因工程疫苗   二价   口蹄疫病毒   结构基因   病毒科   偶蹄动物   FMDV   弱毒疫苗   发热性传染病  

关键词： 禽流感病毒   分子生物学   研究进展   基因工程疫苗   烈性传染病   经济损失   病毒毒力   毒力变异   诊断技术   基因疫苗   理论基础   蛋白质   基因组   系统论   禽类  

摘要： 禽流感是一种主要感染禽类的烈性传染病,能引起巨大的经济损失。该病也能传染人,因此,对禽流感病毒的研究已成为一大热点。目前研究的重点主要集中在其病毒的分子生物学方面,以期能更有效地防制本病。文章从基因组及其编码的蛋白质、病毒毒力、毒力变异、基因疫苗和诊断技术等方面系统论述了禽流感病毒的分子生物学方面的研究进展,为进一步研制禽流感病毒基因工程疫苗及诊断制品,预防该病提供了理论基础。

关键词： 溶藻弧菌   单链抗体   基因工程疫苗  

摘要： 目的:克隆抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体ScFv。方法:从分泌抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中提取总RNA,利用RT-PCR技术,克隆该抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),通过基因重组构建VH-VL的表达载体pTAT-AL1,转化大肠杆菌BL21后用IPTG诱导表达。结果:VH基因序列全长369碱基对,编码123个氨基酸,VL基因序列全长339碱基对,编码113个氨基酸,二者均符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征,含有4个框架区(FRs)、3个抗原互补决定区(CDRs)及抗体特征性的两个半胱氨酸残基。ELISA测定显示基因工程抗体ScFv与原代抗体一样,具有较高的抗原亲和力。结论:成功构建了抗溶藻弧菌独特型抗体ScFv基因并表达于细菌壁膜间隙和包涵体中,为溶藻弧菌独特型抗体单链抗体ScFv成为新一代基因工程疫苗奠定了初步基础。

关键词： 转基因技术   猪   显微注射法   核移植法   基因工程育种   异种器官移植供体   生物反应器  

摘要： 随着转基因技术的不断发展,其在动植物领域都取得了很大的成果。本文综述了国内外转基因猪研究中常用的技术方法,转基因猪研究的概况及转基因猪应用的热点领域等。猪作为重要的经济动物是人类生活关系最为密切的家畜之一。因其妊娠期短,繁殖力很强,后代生长快等特点又使猪成为常用的实验研究动物。猪在解剖、组织、生理和营养代谢等方面均与人类最接近,因此,转基因猪吸引了众多科学家的极大热情,成功实例也证明了其在生命科学研究中具有独特的优越性和实用价值。

关键词： 融合蛋白   β-淀粉样肽(Aβ)   基因工程疫苗   免疫原性  

摘要： 目的: 构建原核表达质粒pHGhis/c-Aβ-c,并在大肠杆菌中表达,观察融合蛋白c-Aβ-c的免疫原性,为阿尔茨海默病(AD)基因工程疫苗的研究打下基础.方法: 采用PCR法,分别扩增编码HBcAg的1～71、88～144氨基酸的基因片断(HBc1～71和HBc88～144),以及编码淀粉样肽Aβ1-42的基因.将后者连接于HBc1～71和HBc88～144之间,构建重组质粒pGEMEX/c-Aβ-c,并将重组基因亚克隆于原核表达载体pHGhis中,构建表达质粒pHGhis/c-Aβ-c,通过温度诱导表达.用SDS-PAGE(考马斯亮蓝染色)检测融合基因的表达.以融合蛋白经腹腔注射免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-Aβ抗体的滴度.结果: 经酶切鉴定、DNA序列测定证实,融合基因重组于表达质粒之中,表达质粒与理论设计相符.诱导表达后,表达蛋白约占细菌沉淀的16%.BALB/c小鼠经3次免疫后,其血清中抗-Aβ抗体的滴度可达1∶16 000,且检测不到抗-HBcAg抗体.结论: c-Aβ-c融合基因在大肠杆菌中可高效表达,表达的融合蛋白具有较强的免疫原性.